世界中医药2018年1月第13卷第l期 女贞子酒制工艺响应曲面法的优化 刘艳红杨欣澜 (陕西国际商贸学院,成阳,712046) 摘要 目的:探讨利用响应曲面法优化女贞子酒制工艺条件。方法:在单因素实验的基础上,选取黄酒用量、闷润时间和 蒸制时间为自变量,以齐墩果酸含量为响应值,应用中心组合设计实验方法,研究各自变量及其交互作用对齐墩果酸含量 的影响,建立二次多项回归方程的数学模型。结果:最终优选的女贞子酒制工艺为:黄酒用量25.19%,闷润时间3.06 h, 蒸制时间5.16 h,在此条件下,齐墩果酸含量的理论值为1.650 35%。结论:响应曲面法建立的数学模型和实验观察数据 相符,优化的女贞子炮制工艺方法简便,有效成分含量高。 关键词女贞子;炮制;齐墩果酸 Optimization of Streamed Processing Technology of Fructus Ligustri Lucidi with Rice Wine by Response Surface Methodology Liu Yanhong,Yang Xinlan (Shaanxi Institute of International Trade&Commerce,Xianyang 7 1 2046,China) Abstract Objective:To optimize the processing technology of Fructus Ligustif Lueidi using response surface methodology.Meth· ods:On the basis of single factor experiment,wine content,soaking time and steaming time as independent variables,with the content of Oleanolic Acid as the response value,central composite experimental design method was applied to study the effects of these variables and their interactions on the content of Oleanolic Acid,and then the mathematical model of two muhinomial regres— sion equation was established.Results:The final optimization of streamed processing technology of Fruetus Ligustri Lucidi with rice wine was wine content 25.19%,soaking time 3.06 h,steaming time 5.16 h.Under this condition,the theoretical value of the content of Oleanolic Acid was 1.65035%.Conclusion:The mathematical model established by response surface method matches the experiment observation data.The optimized Fructus Ligustri Lucidi processing craft method is simple with high effective constit— uents content. Key Words Fruetus Ligustri Lucidi;Processing;Oleanolic Acid 中图分类号:R282.4 文献标识码:A doi:10.3969/j.issn.1673—7202.2018.O1.052 女贞子系木犀科植物女贞Ligustrum lucidum Ait 查阅文献及各地炮制规范,发现关于女贞子的 炮制的方法及工艺各地各法,闷润时间、蒸制时间的 工艺参数也不完备。目前,女贞子药材主要采用酒 的干燥成熟果实,始载于《神农本草经》,列为上品。 其性味甘、苦、凉,归肝、肾经。具有滋肾补肝,明目 乌发的功能。常用于治疗眩晕耳鸣,腰膝酸软,须发 制,炮制过程中在药材是否闷润、蒸制时间及蒸制温 早白,目暗不明等症l1 J,现代研究表明,女贞子提取 度上,2015版《中华人民共和国药典》和全国各省市 物具有降血糖、抗氧化作用,其提取物对糖尿病大鼠 的中药饮片炮制规范,均没有明确规定,即便是有规 肝损伤具有一定保护作用 ,以上发现将为扩大女 贞子的临床应用提供一定的依据。 女贞子的炮制方法始见于宋代·《疮疡》一书, 在女贞子的炮制方法,除了净制、蒸制、酒制、盐制 定,参数也不统一,各地各法 ,如此情况饮片质 量必然受到影响,饮片的优劣,直接影响着中医治病 的疗效 ,因此,规范女贞子酒制工艺意义重大。 酸的含量 ,采用Box—Behnken优化女贞子酒制工 随着历史的发展,炮制方法不断增加,沿用至今。现 本实验中,选取评价指标为女贞子酒制品中齐墩果 确定最佳的酒制工艺参数,为饮片炮制工艺及药 外,还有醋制,全国各地的炮制规范中收载的大多是 艺,酒制[5 3。1963和1977年版《中华人民共和国药典》 材质量的可控性提供依据。 均收载为酒炖法,1985--2015年版《中华人民共和 女贞子用酒20 kg 。 创业训练计划项目(2510) 作者简介:刘艳红(1983.12一),女,硕士研究生,讲师,研究方向:中草药有效成分提取与分离,E—mail:liu.198413@163.con 1仪器与试药 国药典》收载为酒炖法或酒蒸法,用酒量为每100 kg 1.1仪器Waters E2695高效液相色谱仪(Waters 科技上海有限公司),TE124S分析天平(北京赛多利 基金项目:陕西国际商贸学院校级课题(SMXY201504);地方高校国家级大学生创新创业训练计划项目(201513123821);陕西省大学生创新 WORLD CHINESE MEDICINE January 2018,Vo1.13,No.1 35%、40%的黄酒,闷润1 h,蒸制3 h,取出,摊 斯天平有限公司),CP225D电子分析天平(北京赛 30%、多利斯天平有限公司),SHZ-D(1I)循环水式真空泵 于瓷盘中,烘箱中50℃烘于,取出,放凉,粉碎,按上 (巩义市予华仪器有限责任公司),Fw—IOOD高速万 述制样和色谱方法测定其中齐墩果酸含量。黄酒用 能粉碎机(天津鑫博得仪器有限责任公司),KQ—A 量为15%~25%内时,随着黄酒用量的增加,炮制品 玻璃仪器气流烘干机(北京中兴伟业仪器有限公 仪器有限公司)。 1.2试剂 齐墩果酸对照品(购于食品药品检定研 究院,批号:110709.201206);氯仿、甲醇、磷酸溶液 中齐墩果酸含量增加,但随着黄酒用量继续增加,炮 黄酒用量的增加,药材会出现伤水,齐墩果酸流失。 见图2 1.4 司),KH5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声 制品中齐墩果酸含量反而降低,这可能是因为随着 等其他试剂均为分析纯,实验用水为蒸馏水。 1.3分析样品 女贞子(采摘于陕西国际商贸学 院,经生药教研室雷国莲教授鉴定为木犀科植物女 贞的干燥成熟果实)。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱Kromasil CI 8(4.6 11'1111×250 mill,5 txm),流动相:甲醇-0.1%H PO 溶液梯度洗 脱(0~5 rain 85:15;5~14.5 rain 90:10;14.5~18 arin 91:9;18~25 rain 95:5),流速为1 mL/min,测定 波长210 rim,柱温25 。 2.2对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照 品13.07 zng,置25 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻 度,配制成浓度为0.522 8 rag/mI 对照品溶液。 2.3供试品溶液制备精密称取经干燥、粉碎后过 60日筛的女贞子粉末0.5 g,置50 mL具塞锥形瓶 中,精密加氯仿25 mL,称重,超声波处理30 rain,取 出,放冷,再称重,用氯仿补足减失的质量,摇匀,过 滤,即得。 2.4齐墩果酸标准曲线的绘制取0.522 8 mg/mL 的对照品溶液,分别进样2 、4 、8 、1O 、16 、20 ,按上述色谱条件测定峰面积。以峰面积 (A)对齐墩果酸进样量(Ixg)进行线性回归,回归方 程为Y:573 784x+55 174(R =0.999 5),表明齐墩 果酸在1.05~10.46 g范围内具有良好的线性关 系。标准曲线见图1。 y~§7378 SSt74痒 *O.9 ̄9 · O S IO § 孛攀薰, g 图1 齐墩果酸的标准曲线 2.5单因素考察黄酒用量、闷润时问和蒸制时间 3个因素对齐墩果酸含量的影响 … 。 2.5.1 黄酒用量对齐墩果酸含量的影响 精密称 取女贞子25 g,分别加入药材量15%、20%、25%、 1.2 壤 1 錾0:8 黧 辫O 6 撩 O4 l0% 1 2溉 25% 30% 35% 黄濑羯蹙(g/g) 图2 黄酒用量对齐墩果酸含量的影响 2.5.2闷润时间对齐墩果酸含量的影响 精密称 取女贞子25 g,加入药材量25%的黄酒,分别闷润时 问1、2、3、4、5 h,蒸制时问3 h,取出,摊于瓷盘中,烘 箱中50。【=烘干,取出,放凉,粉碎,按上述制样和色 谱方法测定其中齐墩果酸含量。闷润时问为l~3 h 内时,随着闷润时问的延长,炮制品中齐墩果酸含量 增加,但随着闷润时间继续增加,炮制品中齐墩果酸 含量基本不变,考虑节约时间选择闷润时问为3 h。 见,图3 l 4 ^1.3 藿 鬈¨ 撩l l 2 3 4 5 6 溺时闽(h) 图3 闷润时间对齐墩果酸含量的影响 2.5.3蒸制时间对齐墩果酸含量的影响 精密称 取女贞子25 g,加入药材量25%的黄酒,闷润时间3 h,蒸制时间1、3、5、7、9 h,取出,摊于瓷盘巾,烘箱中 50 烘干,取出,放凉,粉碎,按上述制样和色谱方 法测定其中齐墩果酸含量 蒸制时间为l~5 h内 时,随着蒸制时间的延长,炮制品中齐墩果酸含量增 加,说明蒸制过程有利于齐墩果酸的溶出,但随着蒸 制时间继续增加,炮制品中齐墩果酸含量基本不变 或略有下降,可能随着蒸制时间延长有些成分分解。 见图4。 2.6响应曲面优化 2.6.1 响应曲面优选分析在单因素的实验的基 础上,根据Box—Behnken的设计原理,选择黄酒用 世界中医药2018年1月第13卷第l期 ●2 3 4 5 6 7 8 9 m¨ B 量、闷润时间以及蒸制时间为实验的影响因素,以齐 预测和分析。从回归方程显著性检查结果显示:回 墩果酸含量为响应值,采用三因素三水平进行实验 归方程的一次项中,黄酒用量(X )、蒸制时间(X ) 结果分析。在单因素实验的基础上,根据因素水平 对齐墩果酸含量的影响显著,而闷润时间的一次项 ●●0 O o o 0 0 o O 0 表1,按照响应曲面Box.Behnken的设计原理,共有 不显著;在交互项中,黄酒用量和闷润时间(X X )、 l7组实验,其实验结果如下表2~3。 i.5 1.4 黄酒用量和蒸制时间(X,X3)的交互项具有非常显 著影响,其他无显著性;二次项中,黄酒用量(X )、 一 一 一l O O 1 O l 1 l 0 0 O O O 1 1 1摹1.3 盘=1.2 瓣O9 凝 Ol8 O 7 O 2 4 6 8 10 燕错时闻镰) 图4蒸制时间对齐墩果酸含量的影响 表1因素水平 编号 司专 1.127 1.093 1.645 1.351 1.320 1.2l9 1.349 】.434 1.650 1.690 1.683 1.568 1.329 1.342 1.389 1.029 0.936 通过Design—Expel8.0.6软件对所得数据进行 多元回归拟合,得到齐墩果酸含量(Y)对女贞子炮 制中黄酒用量(X ),闷润时间(X ),蒸制时间(X ) 的二次多元回归方程是:Y=1.65+0.044X + 0.024X2+0.039X3—0.16X1X2—0.16X1X3— 0.021X2X3—0.28X1 0.13X2 0.19X3 。 回归方程的R =0.985 1,表明实验值与预测值 有很好的拟合度。且失拟项不显著,表明方程的模 拟好,可以采用这种方法对女贞子的酒制工艺进行 闷润时间(X )、蒸制时问(X )均具有非常显著 性。在各个因素的水平中,对齐墩果酸含量影响结 果由大到小的顺序为黄酒用量(X )>蒸制时间 (X )>闷润时间(X )。见表3。0 o o O O 0 0 O一 表3方差分析表 2.6.2响应曲面图谱与分析 根据模型方程绘制 的响应曲面图与等高线图见图5~7。从图5~7可 以直观地看出三因素的最佳参数及各因素之间的交 互作用。图5表示黄酒用量以及闷润时问及其交互 作用对齐墩果酸含量的影响,从图中可见,黄酒用量 曲面较陡峭,说明黄酒用量对齐墩果酸含量的影响 较显著,闷润时间的曲面较平缓,说明闷润时间对齐 墩果酸含量的影响不明显¨ 。等高线图为椭圆形, 说明黄酒用量和闷润时间的交互项对齐墩果酸含量 影响显著。黄酒用量和蒸制时间对齐墩果酸含量的 影响见图6,黄酒用量和蒸制时间曲面均较陡峭,说 明黄酒用量和蒸制时问对齐墩果酸含量的影响较显 著,等高线图为椭圆形,说明黄酒用量和蒸制时间的 交互项对齐墩果酸含量影响显著。图7为闷润时间 与蒸制时问对齐墩果酸含量的响应曲面图,由图可 以看出当黄酒用量一定时,齐墩果酸含量都是随着 闷润时问与蒸制时间的增加呈现先增加后降低的趋 势,闷润时间与蒸制时间的坡面都较陡,则说明它们 的二次项对齐墩果酸含量的影响都比较显著。等高 线趋于椭圆,但不明显,说明闷润时间与蒸制时问的 交互项对齐墩果酸含量的影响不显著。 根据实验设计所得出的结果以及二次回归模型 0W()… 1)CItIN : :M1'21)1(:lNE.1illlll ̄ll~20I 8.Vo1.13.No I,I,J数 、 :分析 ,他川I)esign—Expet。I 8.(】.6软件汁 他提取 的参数进i 螫,最终r 条件州 1.2为 :IIJ 到女 ¨ 洒制T 的炮制条什为 洒用 25.19%, 涧『l1f 3.06 h,焦制『1 ‘li,J 5.16 h,齐墩 胲 :}}的 沦1.1l[为1.650 35% [ 酒闩 il 25%,闷润II,JlhJ 3.1 h,蒸:刖【JlJ‘ J 5.2}1_、 此条什做3次平行实验,得到齐墩 峻0,9平均禽 1.64%,十lI埘 为().63%, 预测伉接近 为r验 I响 l1fl丽 所 结 以及J 町 施 3 讨论 迎过实验埘优化后地制J 艺条什进 定 对 水实验 建 川’ 法测定女 r·f一齐墩 胲 l i{i仆捉取r f1,j参数 进f 州蘩,达剁 -f吐!操作的 的含 洲定/lr法过程rll’ J 使齐墩 酸和女 r ‘ 求,最终 条件删 为 川挝25%, 叫‘ rI 1其他成分良好分离,探索采用了悌瞍洗脱的方法, 终使齐墩 峻与其他成分实现了较好的分离 炮制l 优化传统 仃il 交 验 均匀试验等 /I"…II} ̄ 个=作为火,fi fi"J参考 响』、 n11 法能 3.I ll,熊删il,¨1Ij 5.2 h f,i 此条件做3}欠 行 究 进·步 效、合 的埘殳 I r约材进i 顷的稳定 验.ii i-i 齐墩 酸的平均 { 为1.64cA、小 验 『 制提 供参亏依据,将 一定程瞍 保 殳 r炮制M P 一一向 ~ .. 向 聱一蔓 I . 较为 吊,lz 川,f0统优化方法 然试验次数少,似精惭, ”,把 祟 州fJIh;/2值的卡丌 f 火系函数化,缱、 连续变; IIII 模 ,刈 符冈索进f J 令皿的优化研究,比il 交 …} 图5 黄酒用量与闷润时间的 间的 图7 闷润时间与蒸制时间的响应曲面图和等高线图 2.7站『求分析 夺 验通过响心曲 法 ‘察了 {Pq Jt i i 、 洲lIl 1f、蒸制时 ×If女 子炮制Ii IlJIf』f 齐墩 胲 } 的 响 二次 ‘ t 的摸 …IJ1 徵 :,l1.二 次力‘ 分fJ 后的火{以J 愉验 ll :,i兑日J1 验所 九勺 玖川 力 确反映.r所 察因素 州 恤之 i『I,J火系,试验 汁科学合 ;利川 lJ_I , 埘影响芹墩 酸含 ,j父谜 素故J 十H 作刖 进 J 探时;迎过I 艺条什的优化得到炙 的酒 制 炮 l 条件为Y.,"iPq』1J城25.19%,闷涧时 3.06 h,燕川¨¨fj 5.16 h, 此条什F,齐墩果酸 f 的 沦 1.650 35% 为_r方他操作,对最 试验没汁 观、精确地得到最优 条什 『fI此得到 优的女贞J 炮川Ii 1 艺条什,为女贞f约 材顷 干l1-…五的呵控 提供你 、 此,陔炮制力‘ 法u】‘以 殳 的炮 li l 研究及 产『f1摊r 川 参考文献 IfI :新IXi 、 -f 约人 M: I’海:I海八【 版}t,I977: 237—239 【! 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(2017—01一l2收稿责任编辑:杨觉雄) 世界中联第十届中医儿科国际学术交流大会 世界中联儿科专业委员会换届改选会议 通知 经世界中医药学会联合会批准,世界中联第十 届中医儿科国际学术交流大会将于2018年7月在 新加坡(7.21—7.23)、马来西亚(7.24—7.28)召 4.面向国际的循证性中医临床诊疗指南研究 5.中医儿科医疗、教学、科研工作经验交流 四、征文要求 开。会议由世界中医药学会联合会儿科专业委员 会、新加坡中医研究院联合主办。 世界中联儿科专业委员会第二届理事会任期已 见《儿科通讯》78期。 五、会议日程 7月21 Et报到,2O:o0—21:3O儿科专业委员会 换届改选会 届满,本次会议期间将同时召开儿科专业委员会换 届改选会议,产生第三届理事会。本次改选工作将 按照世界中联专业委员会章程要求,在海内外中医 7月22—23日第十届中医儿科国际学术交流 大会新加坡学术交流、访问 7月24—27 Et第十届中医儿科国际学术交流 儿科同行中广泛发动,按条件遴选产生新一届理事 会。通知如下: 一大会马来西亚学术交流、访问 7月28日返程 、大会主题 中西医儿科团结合作,为各国儿童健康服务 二、会议内容 六、会议费用 注册费:新加坡代表每人150新元;中国及其他 国家地区代表每人:300新元,或人民币1500元。 差旅正联系旅行社办理。以上两项费用交付办法待 通知。往返机票自购。 七、联系方式 联系人:戴启刚(中国):86—18112938805 助力一带一路建设,推进中医儿科国际学术交 流与合作 在新加坡、马来西亚两国举办世界中联第十届 中医儿科国际学术交流大会召开世界中联儿科专业 委员会换届改选会议 三、征文内容 1.著名中医西医儿科专家学科前沿学术报告 2.儿科热点疾病的临床与实验研究成果报告 3.外治疗法推拿疗法针灸疗法儿科临床应用 Sally Koh(新加坡):65—97973096,联系邮箱: szlek@126.com 世界中医药学会联合会儿科专业委员会 2【】1 7.1 2 14