生理实验2实验二 腓肠肌与坐骨神经腓肠肌标本的制备

实验二 腓肠肌与坐骨神经——腓肠肌标本的制备

实验目的

1、学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法

2、学习并掌握蛙类腓肠肌与坐骨神经——腓肠肌标本的制备方法 3、了解兴奋性细胞的特征

基本原理

蛙类的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织所需的生活条件比较简单，易于控制和掌握。因此在实验中常用蟾蜍或蛙的坐骨神经腓肠肌标本来观察兴奋和兴奋性、刺激与肌肉收缩等基本生理现象和过程。所制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验中必须掌握的一项基本技能。

一、动物与器材

蛙或蟾蜍、常用手术器械（手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针）、蜡盘、蛙板、玻璃棒、固定针、锌铜弓、培养皿或不锈钢盘、污物缸、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。

二、方法与步骤

1．单毁髓和双毁髓 取青蛙一只，左手握住（一般可用纱布包住青蛙躯干部），背部向上。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间沿中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处，此即为枕骨大孔。由枕骨大孔垂直刺入，深度约1毫米左右。将针尖向前刺入颅腔内，左右搅动，捣毁脑组织。此时的动物为单毁髓动物。将毁髓针退至枕骨大孔，针尖转向后方刺入椎管，捣毁脊髓。脑、脊髓完全破坏的标志是蛙的四肢松软，呼吸消失，否则要依上法再行捣毁。

2．剪除躯干上部及内脏 在骶髂关节水平以上0.5~1cm处剪断脊柱。左手握止蟾蜍后肢、用拇指压止骶骨，使蟾蜍头与内脏自然下垂，右手持粗剪刀（非手术剪），沿脊柱两侧剪除一切内脏及头胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及紧贴于

脊柱两侧的坐骨神经。剪除过程中注意勿损伤坐骨神经。 3．剥皮 用蘸有任氏液的左手捏住断开的脊柱后端，右手（可垫着纱布）向后方撕拨掉后肢上的皮肤。将剥干净的后肢放入盛有任氏液的培养皿中。

4．将剪除的头部、内脏及撕剥下来的皮肤等弃置于污物桶中，清洗双手及手术器械。

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5．分离两后肢 用左手托起标本，使标本腹面朝上，右手持粗剪刀沿正中线剪开脊柱和耻骨联合，使两后肢完全分离（注意切勿剪断坐骨神经）。将分开的后肢浸于盛有任氏液的培养皿中。

6．分离坐骨神经 取一侧后肢放在蛙板上，其脊柱端腹面向上，趾端向外侧翻转，使其足底朝上，用蛙钉将标本固定在蛙板上。先用玻璃解剖针沿脊神经向后分离坐骨神经，然后从大腿部的股二头肌和半膜肌之间的裂缝，找出坐骨神经。坐骨神经的基部（即与脊神经相接的部位），有一梨状肌盖住神经，用玻璃解剖针轻轻挑起此肌肉并剪断，即可完全暴露坐骨神经及与其相连的神经。用玻璃解剖针轻轻挑起坐骨神经，自前向后剪去支配腓肠肌之外的分支，将坐骨神经分离至过腘窝处。用粗剪刀剪去脊柱骨及肌肉，只保留坐骨神经发出部位的一小块脊柱骨。取下脊柱端的固定针，用手术镊轻轻提起脊柱骨的骨片，将神经搭在腓肠肌上。

7．分离股骨头 左手捏住股骨，沿膝关节剪去股骨周围的肌肉。剪断股骨，保留股骨的后2/3。

8．游离腓肠肌 用手术镊在腓肠肌跟腱下穿线，并结扎，然后剪断腓肠肌肌腱。游离腓肠肌至膝关节处，沿膝关节将小腿剪掉。即制成了完整的坐骨神经标本。

标本应该包括：坐骨神经、腓肠肌、股骨头和一段脊柱骨

9．用锌铜弓检验标本：用经任氏液蘸湿的锌铜弓的两极接触神经，

如果腓肠肌发生迅速而明显的收缩，则表示标本兴奋性良好。

10．实验完成后，清理台面，将手术器械摆放好，废弃物丢到垃圾桶内。

注意事项

1．剪断脊柱的位置要正确，沿脊柱把下半身剪为左右两大半时，要正中，否则会损伤坐骨神经。

2．在操作过程中要经常滴加任氏液以保持神经标本湿润。

3．神经分离需用玻璃分针，分离过程中操作必须精细，避免用金属器械碰夹神经，以免损伤。同时要注意持针分离方向应由中心向外周，以免将神经上段撕伤。坐骨神经 周围的组织和神经的小分枝，可用分针纯性分离或用剪刀逐步剪掉。 4．在制备标本时，避免过度牵拉神经。

5．分离神经时，一定要把周围结缔组织剥离干净。 6．实验要迅速，以免时间过长影响标本活性（兴奋性）。

7．所用的器械要洁净，接触蛙皮肤，特别是蟾蜍皮肤的用具必须洗净后使用。

三、结果分析

我们做的坐骨神经——腓肠肌标本，股骨上的肌肉清理存在着一些难度，另

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外，神经的剥离不够完全，显得很不美观，主要是剥离时不敢用力，怕扯断神经，动作过分小心。用锌铜弓检验，肌肉收缩良好，但和未分离时我们用锌铜弓检验时的反应还是有一些下降。

五、讨论及思考题

1．剥去皮肤的后肢能用自来水冲洗吗，为什么？

答：不能。要放在任氏液中，用自来水冲洗，因细胞和水不等渗，自来水会进入细胞是其胀破失活，无法进行实验。

2．金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果？ 答：金属器械碰压、触及或损伤神经会损伤神经纤维，破坏神经元之间的连接，使神经传导率降低，使肌肉反应不强，此外，人体相当于电容，通过导电的金属器械时时刺激神经的话，也会使肌肉反应减弱。 3．如何保持标本的机能正常？

答：在分离坐骨神经是使用玻璃分针，勿触碰到金属器械，且在实验时要不时用任氏液润湿，且实验应迅速。

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