要点解析：菊花的组织培养

课题1 菊花的组织培养

要点1 植物组织培养的理论基础

当植物细胞脱离了原来所在植物体的器官或组织而处于离体状态时，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株（即细胞全能性）。

要点2 植物组织培养的基本过程 （1）基本过程

离体的植物组织、器官或细胞 组织培养 脱分化 愈伤组织 组织培养 再分化 试管苗 人为使用植物激素控制

（2）基本概念

细胞分化：植物的个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞分化。

愈伤组织：离体的植物组织或细胞，培养一段时间后，会通过细胞有丝，形成愈伤组织。愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。

脱分化（去分化）：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。

再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。

（3）植物体细胞发育成完整植株（表现出全能性）的条件。

脱离原来所在植物体（离体）、营养供给、激素控制、无菌条件、适宜的温度、pH和光照等。

要点3 影响植物组织培养的因素 （1）材料因素的影响

不同的植物组织，培养的难易程度差别很大，容易进行无性繁殖的植物也容易进行组织培养。同一种植物材料，材料的年龄、保存时间的长短也有影响。幼龄、保存时间短的植物材料容易培养成功。菊花的组织培养，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧芽。

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（2）营养因素的影响

需要配置适宜的培养基，常用的一种培养基是 MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素，以及蔗糖等。

（3）激素的影响

在配置好的MS培养基中，常常需要添加植物激素。植物激素中生长素和细胞素是启动细胞、脱分化和再分化的关键性激素。植物激素的浓度、使用的先后顺序以及用量的比例等，都会影响实验结果。

①按照不同的顺序使用这两类激素，会得到不同的实验结果。 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞素 有利于细胞，但细胞不分化 先使用细胞素，后使用生长素 细胞既又分化 同时使用 分化率提高 ②当同时使用这两类激素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向。 生长素用量比细胞素用量 比值高时 比值低时 比值适中时 植物细胞的发育方向 有利于根的分化、抑制芽的形成 有利于芽的分化、抑制根的形成 促进愈伤组织的生长 （4）pH、温度、光照等条件的影响

不同的植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花的组织培养，一般将pH控制在5.8左右，温度控制在18～22℃，并且每日用日光灯照射12h。

要点4 植物组织培养技术的优点

植物组织培养技术可以实现优良品种的快速繁殖，保持遗传性状的一致；可以实现花卉的连续生产，不受开花季节的。

要点5 实验操作 （1）制备MS固体培养基 ①配置各种母液

将各种成分按比例配制成浓缩液，使用时，根据浓缩液比例计算用量，加水稀释。

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②配置培养基 ③灭菌

（2）外植体消毒 ①过程

流水冲洗→软刷刷洗→流水冲洗20min→无菌吸水纸吸干外植体表面→体积分数为70﹪的酒精中摇动2～3次，持续6～7s→无菌水清洗→无菌吸水纸吸干外植体表面→质量分数为0.1﹪的氯化汞溶液中1～2min→无菌水中至少清洗3次。

②注意事项

对外植体进行表面消毒时，既要考虑药剂的消毒效果，又要考虑植物的耐受能力。

（3）接种

接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍。将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的菊花茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5～1cm）。左手持锥形瓶，右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥于右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰；右手用镊子夹取菊花茎段，插入培养基中。插入时应注意方向，不要倒插。接种后，将封口膜重新扎好。

（4）培养

在无菌箱中培养，温度控制在18～22℃，每日用日光灯光照12h。 （5）移栽

先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间培养几日。然后用清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土土壤中。

（6）栽培 要点6 疑难解答

（1）你能说出MS培养基中各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？

微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同

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时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。

（2）你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？

可以安排学生分组，做不同的材料或配方，最后分别汇报成果。但每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。

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