叶绿素含量的测定

实验题目：叶绿素含量的测定

姓名 班级

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一、 实验原理和目的

根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比 。 叶绿素(丙酮)在652nm(混合）、663nm、5nm有最大吸收峰。

叶绿素(95%乙醇)在665nm、9nm，类胡萝卜素在470nm有最大吸收峰，根据在分光光度计下测定的吸光度，求得叶绿素的含量

二、 实验器具和步骤 植物材料： 女贞

实验器具： 分光光度计；电子天平； 研钵； 试管； 小漏斗；滤纸； 吸水纸； 移液管 ；量筒； 剪刀

试剂： 95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸钙粉

步骤：1.称取剪碎的新鲜样品0.1g 左右，放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及3～5ml 95％乙醇，研成均浆，继续研磨至组织变白。静置3～5min

2. 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到10ml试管中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。

3.用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。最后用乙醇定容至10 ml ，摇匀

4. 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。以95％乙醇为空白，在波长665nm、9nm、470nm下测定吸光度 5. 计算公式：

叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A9； Cb=24.96A9－7.32A665

C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L

三、 实验数据和作业 2、计算叶绿素含量 计算公式：

叶绿素的含量（mg/g）= (浓度×提取液体积×稀释倍数）/样品鲜重。 Ca=13.95A665－6.88A9； Cb=24.96A9－7.32A665

C类=(1000A470-2.05Ca-114.8Cb)/245 单位：mg/L

由上面的公式进行代入计算，有：

Ca=13.95*1.820-6.88*0.953=18.83236 Cb=24.96*0.953-7.32*1.820=10.448

C类=（1000*1.948-2.05*18.83236-114.8*10.448）/245=2.01

则：叶绿素含量=（29.29684*10*0.001*1）/0.1=2.9297 四、 数据分析

实验中可能清洗研钵和滤纸不是特别干净可能造成误差 五、 思考题

为什么提取叶绿素时干材料一定要用 80％的丙酮，而新鲜的材料可以用无水丙酮提取？

答：因为叶绿素存在于叶绿体内囊体上与其上的蛋白质组成色素蛋白复合体，要分离叶绿素和蛋白质必须有水，叶绿素的头部为极性的，有亲水性