垦 坠 堂壅查 生 旦箜３２卷堡１８期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１８ （７）：６６９－６７０． Ｅ２２３许羚雁，黄宪章，庄俊华．类风湿关节炎的免疫学检测方法进展 ＥＪ３．国际检验医学杂志，２００８，２９（１）：５１—５３． ［２８吴庆．抗可提取性核抗原抗体与抗核抗体的对照分析［Ｊ］．国际检 Ｅ２５］Ｍｉｔｓｕｄｏｍｉ Ｔ，Ｋｏｓａｋａ Ｔ，Ｙａｔａｂｅ Ｙ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｉｍｐｌｉｃａ ｔｉｏｎｓ ｏｆ ＥＧＦＲ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ， 验医学杂志，２００６，２７（８）：６７９—６８０． ２００６，１１（３）：１９０—１ ９８． ［２４］刘军锋，贾克刚，刘运德．免疫印迹法检测在自身免疫性疾病 ＥＮＡ多肽抗体谱及临床意义［Ｊ］．国际检验医学杂志，２００６，２７ （收稿日期：２０１１－０８—２１） ・综 述・ 流行性乙型脑炎病毒基因结构的研究进展 许丽娟综述，朱朝敏审核 （重庆医科大学儿童医院４０００１６） 关键词：脑炎； 脑炎病毒；基因 ＩＮ）ｌ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１１．１８．０２０ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０１１）１８—２０８９—０３ 流行性乙型脑炎（简称乙脑）每年大约有（３５～５０）×１０。 表位诊断乙脑提供了潜在的重要性依据，并有助于进一步阐明 例患者，其中约１０×１０。例患者死亡＿１］。乙脑患者中重症患者 乙脑病毒ＰｒＭ／Ｍ的抗原结构和生物学功能＿ｇ］。 往往留下各种神经系统后遗症，乙脑病毒主要经蚊虫或吸血昆 Ｅ蛋白是乙脑病毒最主要的结构蛋白，位于病毒的表面， 虫传播，携带乙脑病毒的蚊虫叮咬人体后，病毒先在单核一巨噬 由５００个氨基酸残基组成，具有决定病毒毒力、病毒入侵和病 细胞内增殖，随后进入血流，引起免疫反应，抗体与病毒抗原结 毒的免疫原性的作用＿７］。Ｅ蛋白的这种作用机制是因为其作 合，沉积于脑实质和血管内皮细胞，激活补体，产生免疫 为一种膜融合蛋白，能介导病毒包膜和细胞膜的结合，这种结 损伤 。 合使得病毒进入细胞并感染细胞 ］。Ｅ蛋白的氨基酸序列具 乙脑主要发病于亚洲地区和太平洋地区，我国地域广阔， 有高度保守性，但在其结构的部分区域是会有变化的，如在乙 占亚洲四分之一区域，除了、青海、外，其余各地均有 脑病毒持续感染细胞的过程中Ｅ蛋白的氨基酸序列会有部分 病例发生ｌ１］。因此深入研究中国流行乙脑病毒的分子生物学， 发生突变 ］。许多研究还表明，氨基酸序列中位于Ｅ６０～６８ 对于了解亚洲乃至全世界的乙脑病毒的特性具有举足轻重的 的Ｃｙｓ—Ｔｙｒ－Ｈｉｓ Ａｌａ—Ｓｅｒ－Ｖａｌ—Ｔｈｒ—Ａｓｐ—Ｔｈｒ，在诱导产生细胞免 作用。现主要叙述乙脑病毒有关基因结构方面的进展。 疫中起最关键的作用＿１ 。乙脑病毒Ｅ蛋白的三维结构主要由 １ 乙脑病毒的基本基因组结构 ３个结构域（Ｉ、Ⅱ、１１Ｉ）组成，其中结构域ＨＩ（Ｅ３ｌ０ｂＥ４１１）可独 乙脑病毒同其他黄病毒一样，为一单股正链的ＲＮＡ病 立地在病毒表面折叠成为免疫球蛋白样结构，由于它的这种构 毒，全长约１１ ｋｂ，中间有一个开放读码框。乙脑病毒的血清学 象，许多抗原中和表位都集中于此结构域。Ｚｈａｏ等［１ 的研究 包括有８种类型和２种亚型，分别为Ｗｅｓｔ Ｎｉｌｅｖｉｒｕｓ（ＷＮＶ）、 表明位于第１和第Ⅱ结构域部位的连接处的Ｅ一１３８残基，对乙 Ｋｕｎｊｉｎ ｖｉｒｕｓ（ａ ｓｕｂｔｙｐｅ ｏｆ ＷＮＶ）、Ｍｕｒｒａｙ Ｖａｌｌｅｙ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ 脑病毒的神经毒力和神经侵袭力有重要的决定作用。 ｖｉｒｕｓ（ＭＶＥＶ）、Ａｌｆｕｙ ｖｉｒｕｓ（ａ ｓｕｂｔｙｐｅ ｏｆ ＭＶＥＶ）、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ ３ 乙脑病毒基因结构的变异 ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＳＩ ＥＶ）、Ｕｓｕｔｕ ｖｉｒｕｓ（ＵＳＵＶ）、Ｋｏｕｔａｎｇｏ ｖｉ— 在以往关于乙脑病毒基因变异的研究中，比较了分离于一 ｒｕｓ、Ｙａｏｕｎｄｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｃａｃｉｐａｃｏｒｅ ｖｉｒｕｓｌ３ｊ。乙脑病毒的基因 个国家内部（如日本）和分离于不同国家的病毒的差异（如日本 顺序从５ 端到３ 端依次为Ｃ ｐｒｅＭ—Ｅ—ＮＳ１ ＮＳ２Ａ—ＮＳ２Ｂ ＮＳ３一 和泰国或者日本和印度）。总的发现，分离于不同时间和不同 ＮＳ４Ａ—ＮＳ４Ｂ－ＮＳ５ Ｅ 。 地区的病毒有序列上的差异＿６］。在Ｃｈｅｎ等 的研究中，他们 ２ 乙脑病毒基因结构的编码区 观察了来自于较广泛地区和有５２年时间跨度的４６例乙脑病 乙脑病毒的编码区能编码３种结构蛋白（核衣壳蛋白ｃ、 毒的ｐｒｅ Ｍ序列，结果显示分离于同一地区同一时间段的病毒 膜蛋白Ｍ和包膜蛋白Ｅ）和７种非结构蛋白（包括ＮＳ１、 的ｐｒｅ Ｍ序列非常相近，但是分离于不同地区不同时间段的病 ＮＳ２Ａ、ＮＳ２Ｂ、ＮＳ３、Ｎｓ４Ａ、ＮＳ４Ｂ和ＮＳ５） ］。乙脑病毒的生物 毒之间存在变异，不过大多数核苷酸的改变都是属于沉默突 学性质主要由其编码的结构蛋白决定，如和细胞受体的结合、 变，并没有改变所编码的氨基酸。这些都提示乙脑病毒在自然 机体免疫反应的产生等 ］。 界存在不断的进化。但是Ｙｕｎ等¨】 对分离于朝鲜的乙脑病毒 核衣壳蛋白（ｃ蛋白）由１２７个氨基酸组成，Ｃ蛋白的Ｃ端 稳定性的研究表明Ｅ基因具有高度的稳定性，在他们研究的 疏水性氨基酸将其固定在宿主细胞的粗面内质网膜上，以便装 １Ｏ株毒株中，尽管分离于不同的地区，而且有了５年的时间跨 配成包裹基因组的核衣壳，使之免受核酸酶的破坏［７］。 度，但是所得到的Ｅ基因的序列是一致的。 膜蛋白（Ｍ蛋白）由７５个氨基酸残基组成，是病毒诱发保 Ｗａｎｇ等＿１ 将从三带喙库蚊分离出来的病毒与减毒活疫 护性免疫的协同成份。Ｍ蛋白能诱发中和抗体，现在的一些 苗株ＳＡ１４—１４—２相比，发现Ｅ蛋白在核苷酸与氨基酸的同源性 研究表明在乙脑病毒的ＰｒＭ／Ｍ蛋白上有一线性的表位，并证 分别为８８．０ 和９７．２ ，并且在Ｅ蛋白上一共有１４处氨基酸 明是一个线性的Ｂ细胞表位，即Ｍ１４—１３。这个线性的Ｂ细胞 差异。Ｚｈａｎｇ等 于２００７年从中国南部的三带喙库蚊中分离 表位是乙脑病毒所特有的，它只能和乙脑病毒猪血清或者兔血 得到的病毒株ＳＨ１７Ｍ，发现其有５个独特的氨基酸，其中一处 清发生反应，而不能和抗ＤＥＮＶ、抗ｗＮＶ血清反应，且在不同 是位于Ｅ蛋白第３０６位点（谷氨酸变异为赖氨酸）。姜红月 的乙脑病毒序列中具有高度的保守性，这对根据病毒特异性的 等ｌｌ ２００８年新分离的２株乙脑病毒（ＨＢＺＧ０８—０９和ＨＢＺＧ０８— ・ ２Ｏ９Ｏ ・ 国际检验医学杂志２０１１年１１月第３２卷第１８翅－Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍ—ｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０—１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．１８ ５５）之间共有１９７个核苷酸的差异，总差异率为１．８０ ，推断 氨基酸序列有８个位点差异，总差异率为０．２３ 。在５ ｒ＿Ｃ－ ｐｒｅＭ—Ｅ编码区中Ｅ基因区段核苷酸差异率最高，为２．３３ ， 但是３５个核苷酸差异仅引起１个氨基酸的改变。非结构蛋白 ＮＳ１一ＮＳ２ａ—ＮＳ２ｂ ＮＳ３一ＮＳ４ａ—ＮＳ４ｂ—ＮＳ５ ３ 编码区均存在大小 不等的核苷酸差异，其差异率在ｌ＿５３ ～２．４３ 之间，氨基酸 差异不大。姜红月等还将新分离的ＨＢＺＧ０８—０９株和 ＨＢＺＧ０８—５５株与３４株其他乙脑病毒全基因组核苷酸及氨基 酸序列进行同源性比较分析，其核苷酸同源性分别是８３．５ ～９９．４ 和８３．６ ～９８．７ ，氨基酸同源性均为９５．０ ～ ９９．９ 。ＨＢＺＧ０８—０９株与中国浙江省２００７年分离的ＸＪ６９株 核苷酸同源性最高，ＨＢＺＧ０８—５５株与中国河南２００７年分离的 ＨＥＮ０７０１株核苷酸同源性最高，２株与ＪＫＴ６４６８株同源性都 很低。与ＳＡ１４—１４—２减毒活疫苗株相比，其核苷酸同源性分别 是８８．７ 和８８．６ ，氨基酸同源性均为９７．６ 。ＨＢＺＧ０８ ０９ 株和ＨＢｚＧＯ８ ５５株与减毒疫苗株ＳＡ１４—１４—２相比，结构蛋白 ５ ｒ＿Ｃ ｐｒｅＭ—Ｅ编码区中，囊魔基因区的核苷酸差异率最高，为 １２．２７ 和１２．６Ｏ ；衣壳基因区最低，为７．０９ 和７．３５ 。非 结构蛋白中ＮＳ４ｂ区没有引起氨基酸的差异，ＮＳ１、ＮＳ２ａ、 ＮＳ２ｂ区的氨基酸差异均高于ＮＳ３、ＮＳ４ｂ、ＮＳ５区，前者差异率 均大于３ ，而后者均在２ 左右。 Ｙｏｓｈｉｄａ等 将分离于１９９１年或者更早的毒株与Ｊａ ＧＡｒ０１、Ｎａｋａｙａｍａ毒株相比较，核苷酸同源性分别为９Ｏ．１ ～ ９６．４ 和９１．１ ～９５．５ 。分离于１９９４年或晚于１９９４年的 ３个毒株（ＪａＴＡｎｌ／９４、ＪａＴＡｎｌ／９９和ＪａＴＡｎｌ／ｏｏ）与Ｋ９４Ｐ０５ 株（于１９９４年分离于韩国的南部）之间的同源性为９７．７ ～ ９８．１ 。 ４ 乙脑病毒基因结构变异对病毒的影响 乙脑病毒之间的变异已经有许多研究者通过不同的方法 研究过，但是，这些变异对病毒影响方面的研究尚未有进 展ｌ＿】 。一些研究表明Ｅ蛋白氨基酸的变异和乙脑病毒的毒性 相关 。通过对比ＳＡ１４的野生型和减毒型，Ｎｉ等 发现在 Ｅ１３８位点（谷氨酸变异为赖氨酸）、Ｅ１７６（异亮氨酸变异为缬氨 酸）、Ｅ３１５（丙氨酸变异为缬氨酸）、Ｅ４３９（赖氨酸变异为精氨 酸）发生的变异有可能降低乙脑病毒的神经毒力和神经侵袭 力。Ｃｈａｍｂｅｒｓ等 的研究显示乙脑病毒的很多可能的位点 和病毒毒力的减弱有关。然而，Ｅ蛋白仅仅只有２个位点，即 １３８和２７９，决定了病毒的致病性 。Ｔａｊｉｍａ等Ｅ２］ 的研究中， 他们集中在４个位点上，即Ｅ蛋白的１２３、１２９、２２２和２２７位 点。结果表明１２３位点是决定病毒毒力的一个决定性位点之 一，１２３位点的变异增加了毒株Ｍｉｅ／４１／２００２在小鼠神经细胞 瘤Ｎ１８细胞内的生长速率。Ｈｕｎｇ等 的研究显示在黄病毒 Ｅ蛋白第三结构域上的变异改变了病毒黏附和进入宿主细胞。 Ｌｅｅ等 的研究表明在乙脑病毒Ｅ蛋白的Ｅ一４９、Ｅ一１３８、Ｅ一３０６ 或者Ｅ一３８９位残基的变异减少病毒黏附宿主细胞上乙酰碳酸 盐残基的效率。 ５ 乙脑病毒的分型 根据乙脑病毒Ｐｒｍ和Ｅ基因的性核苷酸序列，乙脑 病毒被分为４种基因型，且４种基因型别的测序工作已经顺利 完成。基因Ｉ型包括从１９６７～今分离于泰国北部、柬埔寨、朝 鲜、中国、日本、越南、和澳大利亚的病毒；基因Ⅱ型包括从 １９５４年至１９９９年分离于泰国南部、马来西亚、印度尼西亚、巴 布亚新几内亚和澳大利亚的病毒；基因Ⅲ型是从１９３２年至今 分离于亚洲大部分热带地方的病毒，包括日本、中国、、菲 律宾和亚洲次；基因Ⅳ型包括从１９８０～１９８１年分离于印 度尼西亚的病毒 。根据有限的信息，分离于马来西亚的１ 个病毒有可能属于乙脑病毒的第５种型别。Ｍｏｈａｍｍｅｄ等 的研究中，他们完成了Ｍｕａｒ病毒的核苷酸和氨基酸测序，并 且和其他４种测序完的基因型别相对比，发现Ｍｕａｒ病毒和他 们有相似之处，核苷酸变异率从２Ｏ．２ ～２１．２ ，氨基酸变异 率从８．５ ～９．９ ，进化系统树分析Ｍｕａｒ病毒揭示其是乙脑 病毒的第５种型别。目前，分离于中国的乙脑病毒有基因Ｉ型 和基因Ⅲ型，其中基因Ⅲ型分离于１９４０年，而基因Ｉ型分离于 １９７９年，奇怪的是，在上海分离得到的乙脑病毒每年的型别不 一样，其中２００１年、２００３年和２００５年属于基因Ｉ型，２００４年 分离得到的属于基因Ⅲ型 。 ６结 语 乙脑病毒是人畜共患病的一种中枢神经系统的急性传染 病，是引起人类病毒性脑炎的最主要的病原体，对世界公共健 康造成很大的威胁。虽然现在人们对乙脑结构研究得比较透 彻，加上乙脑是用疫苗可以预防的疾病，但是随着环境和时问 的变化，病毒之间存在一定的差异，因此应该努力研究出适合 各地区人群的乙脑疫苗，降低乙脑患病率，提高生活质量。 参考文献 ［１］Ｓａｐｋａｌ ＧＮ，Ｗａｉｒａｇｋａｒ ＮＳ，Ａｙａｃｈｉｔ ＶＭ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｓｏｌａ ｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｆｒｏｍ ｂｌｏｏｄ ｃｌｏｔｓ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｄｕｒ— ｉｎｇ ｔｈｅ ａｃｕｔｅ ｐｈａｓｅ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｔｒｏｐ Ｍｅｄ Ｈｙｇ，２００７，１６ （４１）：ｌ１ ３９ １１４５． Ｅ２Ｊ杨珍，沈应杰．１０４例流行性乙型脑炎临床分析［Ｊ］．现代医药卫 生，２００８，２４（６）：９５． ［３］Ｃｕｉ Ｊ，Ｃｏｕｎｏｕ Ｄ，Ｓｈｅｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ ｂａｔｓ ｉｎ ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｍｅｄｉ ａｎｄ Ｈｙｇｉｅｎｅ，２００８，７８（４）：１００７． Ｅ４］Ｉ ｉｎｄｅｎｂａｃｈ ＢＤ，Ｒｉｃｅ ＣＭ．Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ：ｔｈｅ ｖｉｒｕｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｒｅｐｌｉ— ｃａｔｉｏｎ，４ｔｈ ｅｄ［Ｍ］．Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ：Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００１． ［５］Ｚｈａｎｇ ＪＳ，Ｚｈａｏ ＱＭ，Ｇａｏ ＸＦ，ｅｔ ａ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃ— ｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｔｙｐｅ １ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ，Ｃｈｉｎａ， ２ｏｏ９［Ｊ］．ＰｌｏｓＯｎｅ，２０１１，６（１）：１ ６４１８． ［６］Ｃｈｅｎ ＷＲ，Ｔｅｓｈ ＲＢ，Ｊｏｈｎ ＪＢ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ ｎａｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ，ｌ９９０，７１（１８）：２９１５－２９２２． ［７］郭杨，郭万柱．流行性乙型脑炎病毒及其研究进展［Ｊ］．预防医学 情报杂志，２００８，２４（１）：４４—４６． ［８］Ｈｕａ ＲＨ，Ｃｈｅｎ ＮＳ，Ｍｏｈａｌ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｖｉｒｕｓ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ Ｂ－ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ ｔｈｅ ＰｒＭ／Ｍ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ；ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｏ ｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈ Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｗｅｓｔ ｎｉｌｅ ａｎｄ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１０，７（１１）：３１３． ［９］１．ｉ Ｑ，Ｘｕ Ｋ，Ｈｕ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｇｌｙ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｍｕｔａｎｔ ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ［Ｊ］．Ｚｈｏｎｇ Ｈｕａ Ｕｎｉｖｅｒ— ｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，２６（１３）：４０９—４１Ｏ． Ｅｌｏ］Ｔａｋａｄａ Ｋ，Ｍａｓａｋｉ Ｈ，Ｋｏｎｉｓｈｉ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎ ｅｐｉｔｏｐｅ ｏｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ（ＪＥＶ）ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ｂｙ ＪＥＶ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｕｒｉｎｅ ＣＤ８＋ｃｙｔｏ ｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｖｉｒｏｌ，２０００，１４５（６２）：５２３～５３４． ［１１］Ｚｈａｏ ＺＪ，Ｄａｔｅ Ｔ，Ｚｈａｎｇ Ｗ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ １ ３８ （Ｇｌｕ／ｈ，ｙｓ）ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｓｔａ— ｂｌｅ，ｆｕｌｌ—ｌｅｎｇｔｈ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｅＤＮＡ ｃｌｏｎｅ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌ，２００５，８６（９１）： ２２０９—２２２０． 垦 坠医堂 童２０１１年Ｉｉ月第３２卷第１８期Ｉｎｔ Ｊ Ｌａｂ Ｍｅｄ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ２０１１，Ｖｏ１．３２，Ｎｑ １８ ［１２３ Ｙｕｎ ＳＭ，Ｃｈｏ ＪＥ，Ｊｕ ＹＲ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｊａｐａ ｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｉｎ Ｓｏｕｔｈ Ｋｏｒｅａ．１９８３——２００５ ・２Ｏ９１ ・ Ｌｙｓ）ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｓｔａｂｌｅ， ｆｕｌｂｌｅｎｇｔｈ，ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ［Ｊ７．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，２００５，８６（４２）： ２２０９—２２２０． ＥＪ３．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１０，７（１６）：１２７． Ｌ１３］Ｗａｎｇ ＨＹ，Ｇａｏ ＸＹ，Ｓｏｎｇ ＬＺ，ｅｔ ａｌ，Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｆｉｒｓｔｌｙ ｉｎ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ｐｒｏｖｉｎｃｅ［Ｊ］． Ｚｈｏｎｇｇｕｏ Ｙｉ Ｍｉａｏ Ｈｅ Ｍｉａｎ Ｙｉ，２００９，１５（４）：３３７—３４０ ．［２１］Ｔａｊｉｍａ Ｓ，Ｎｅｒｏｍｅ Ｒ，Ｎｕｋｕｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｉｎｇＩｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｊａｐ— ａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ Ｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｓ１２３Ｒ）ｉｎｃｒｅａｓｅｓ ｉｔｓ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ［１４］Ｚｈａｎｇ ＪＳ，Ｚｈａｏ ＱＭ，Ｚｈａｎｇ ＰＨ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａ Ｊａｐ— ａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｓｏｌａｔｅ ｆｒｏｍ ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ７．Ａｒｃｈ Ｖｉｒ— ｏｌ，２００９，１５４（７）：ｌ１７７—１１８０． ＥＪ７．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２０１０，３９６（６７）：２９８—３０４． Ｅｅ２］Ｈｕｎｇ ＪＪ，Ｈｓｉｅｈ ＭＴ，Ｙｏｕｎｇ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ａｎ ｅｘｔｅｒｎａｌ ｌｏｏｐ ｒｅｇｉｏｎ ｏｆ ｄｏｍａｉｎⅢｏｆ ｄｅｎｇｕｅ ｖｉｒｕｓ ｔｙｐｅ ２ ｅｎｖｅｌｏｐｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ［１５］姜红月，李铭华，杨小兵，等．湖北省新分离的２株乙型脑炎病毒 ｓｅｒｏｔｙｐｅ—ｓｐｅｃｉ？ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｍｏｓｑｕｉｔｏ ｂｕｔ ｎｏｔ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ［Ｊ７． 全基因组序列特征分析［Ｊ］．中华预防医学杂志，２Ｏ１０，４４（５ｏ）： Ｊ ＶｉｒｏＩ，２００４，７８（９）：３７８—３８８． ４３８—４４３． Ｅ２３］Ｌｅｅ Ｅ，Ｌｏｂｉｇｓ Ｍ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｏ— ［１ ６］Ｙｏｓｈｉｄａ Ｙ，Ｔａｂｅｉ Ｙ，Ｈａｓｅｇａｗａ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｓａｍｉｎｏｇｌｙｃａｎ—ｂｉｎｄｉｎｇ ｖａｒｉａｎｔｓ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｓｗｉｎｅ ｉｎ Ｔｏｋｙｏ， ｍｕｒｒａｙ ｖａｌｌｅｙ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００２，７６（６２）：４９０１— Ｊａｐａｎ￣Ｊ］．Ｊｐａ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ，２００５，５８（６２）：２５９—２６１． ４９１１． ［１７］Ｏｋｕｎｏ Ｙ，Ｏｋｕｄａ Ｔ，Ｋｏｎｄｏ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｍｍｕｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ［２４］Ｓｃｈｕｈ ＡＪ，Ｌｉ Ｌ，Ｔｅｓｈ ＲＢ，ｅｔ ａ１．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｉ— ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｂｙ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ， ｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ：ｇｅｎｏｔｙｐｅ １Ｉ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｃｉｒｅｕ— ｈａｅｍａｇｇｌｕｔｉｎａｔｉｏｎ—ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ—ｆｉｘａｔｉｏｎ ｔｅｓｔ［Ｊ］． ｌａｔｉｎｇ ｓｉｎｃｅ ａｔ ｌｅａｓｔ １ ９５１＿Ｊ］．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，２０１０，９１（８）：９５—１０２． Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ｏｆ Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，１９６８，２１２（１４）：５４７—５６３． ［２５］Ｍｏｈａｍｍｅｄ ＭＡ，Ｇａｌｂｒａｉｔｈ ＳＥ，Ｒａｄｆｏｒｄ ＡＤ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｐｈｙ— ［１８］Ｎｉ Ｈ，Ｃｈａｎｇ ＯＪＪ，Ｘｉｅ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｂａｒｒｅｔｔ ＡＤＴ（１ ９９５）ｔｏｏｌｅｃｕｌａｒ ｂａ— ｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｙ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｍｕａｒ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎ— ｓｉｓ ｏｆ ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｅｕｒｏｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｆ ｗｉｌｄ—ｔｙｐｅ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈ— ｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｒｅｖｅａｌ ｉｔ ｉｓ ｔｈｅ ｍｉｓｓｉｎｇ ｆｉｆｔｈ ｇｅｎｏｔｙｐｅ［Ｊ３．Ｉｎｆｅｃｔ Ｍｉｆｓ ｖｉｒｕｓ ｓｔｒａｉｎ ＳＡ１４ＥＪ］．Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ，２００８，７６（２１）：４０９—４１３． Ｇｅｎｅｔ Ｅｖｏｌ，２０１１，７１（２４）：２３１１—２３２０． ［１９］Ｃｈａｍｂｅｒｓ ＴＪ，Ｄｒｏｌｌ ＤＡ，Ｊｉａｎｇ Ｘ，ｅｔ ａ１．Ｎａｋａｙａｍａ／ＪＥ ＳＡ１４－１４—２ ［２６］Ｗａｎｇ．ＨＹ，Ｔａｋａｓａｋｉ Ｔ，Ｆｕ ＳＨ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｊａｐａ— ｖｉｒｕｓ ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｒｅｇｉｏｎ ｉｎｔｅｒｔｙｐｉｃ ｖｉｒｕｓｅｓ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｉｎ ｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７，８８（１４）：８８５— ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｎｅｕｒｏｉｎｖａｓｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ７．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２００７，３６６ ８９４． （３５）：５１—６１． ［２ｏ］Ｚｈａｏ ｚ，Ｄａｔｅ Ｔ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｅ一１３８（Ｇｌｕ／ （收稿日期：２０１１－０２ １６） ・综 述・ 使用尿液流式分析仪ＵＦ一１０００ｉ进行尿液检测的研究进展 何雨峰 综述，赵克斌 ，杨泽华 ，李 浩 审校 （１．山西医科大学研究生学院，太原０３０００１；２．山西医科大学附属第一医院，太原０３０００１） 关键词：泌尿道感染； 尿液流式细胞仪； 细菌培养 Ｄ０Ｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３—４１３０．２０１１．１８．０２１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７３—４１３０（２０１１）１８—２０９２—０３ 尿液检测以其简便、快捷、标本易得而被临床广泛应用，是 １．１流式细胞计数技术 ＵＦ一１０００ｉ利用鞘流机制使染色后 目前检验科三大常规检查项目之一，能为临床提供丰富的信 的标本形成细胞流，确保尿液中的细胞成份始终以单队列穿过 息。如今多数实验室对于尿液中有形成份的分析采用尿沉渣 检测系统并处于悬浮状态。在红色半导体激光束的照射下，每 显微镜检测、尿干化学法、尿细菌培养以及尿液流式细胞分析。 个尿细胞都将暴露在高度密集的激光束下，单个细胞会按不同 尿沉渣显微镜检测虽然被视为尿沉渣检测的金标准，但受检测 角度发出荧光和散射光。从前向散射光中获得细胞大小的信 者的主观因素影响较大，结果判断不一致，可比性差且费时费 息。从侧向散射光中获知细胞表面和胞质内的性状的信息，从 力 ］。干化学法灵敏度较高，但受多种物质干扰，假阳性和假 荧光强度可以获知细胞核的性状（核糖核酸和脱氧核糖核酸的 阴性较多 ］。为了提高尿液检测的准确性和提高效率，流式细 数量）。 胞分析应运而生。ＵＦ－１０００ｉ全自动尿液流式细胞仪是日本希 森美康医用电子有限公司继ＵＦ－５０、ＵＦ—ｉ００和ＵＦ－１００ｉ后于 ２００５年推出的一套较先进的尿液有形成份分析系统，其以简 便、快速、有效的特点受到临床工作者的青睐Ⅲ。 １ ＵＦ一１０００ｉ的工作原理 ＵＦ一１０００ｉ的分析原理是用红色半导体激光束照射染色后 在鞘流贯流分析池中形成的鞘流样本，并通过对各粒子产生的 前向散射光、侧向散射光以及侧向荧光信号转换成的光电信号 图１ ＵＦ－１０００ｉ半导体激光技术和核酸染色技术原理图 进行分析，从而对各个粒子进行识别。 １．２荧光染色技术 ＵＦ－１０００ｉ具有两种荧光染料，一种是 通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｙｙｙｊｙｋｚｋｂ＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ。
