热带作物学报２０１２，３３（８）：１４６０—１４６５ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ＴｍＤｉｃａｌ Ｃｒｏ 番茄ＮＡＭ基因的克隆与遗传转化 杨春文，唐 宁，李正国 妻庆雾高 重庆市高校功能基因与调控新技术重点实验室矗 鼎 点萋验萎重庆４ 里仄 ０００３０ 摘 要 为了研究番茄 Ｍ基因的功能，利用ＲＴ—ＰＣＲ技术从番茄ｃＤＮＡ中分离了ＮＡＭ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号： ＦＪ４３５１６３．１）基因，该基因ＯＲＦ全长１ ０５３ ｂｐ，共编码３５１个氨基酸，Ｎ端含有ＮＡＣ结构域。定量ＲＴ—ＰＣＲ分析 结果表明，该基因在番茄的根、茎、叶、花和果实中均有较强表达。为了进一步研究番茄ＮＡＭ基因的功能．构 建了ＮＡＭ基因的超表达载体ｐＬＰＩＯ０—３５Ｓ—ＮＡＭ，通过农杆菌介导法转化番茄，并获得抗性植株。经表型分析， 转基因番茄植株矮小，生长受到抑制，叶片形态异常，表明Ｍ 基因影响番茄顶端分生组织（ＳＡＭ）的形成和叶 片形态的发生 关键词番茄；ＮＡＭ；克隆；遗传转化 中图分类号Ｓ６４１．２ 文献标识码Ａ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＡＭ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｔｏｍａｔｏ ＹＡＮＧ Ｃｈｕｎｗｅｎ，ＴＡＮＧ Ｎｉｎｇ，ＬＩ Ｚｈｅｎｇｇｕｏ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ Ｌｏｂ ｏｆ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ Ｔｅｅｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｕｎｄｅｒ Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ ４０００３０，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｏ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＮＡＭ ｇｅｎｅ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ，ｔｈｅ ｆｕｌｌ ｌｅｎｇｔｈ ｃＤＮＡ ＮＡＭ ｇｅｎｅ ｗａｓ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｂｙ ＲＴ—ＰＣＲ ｆｒｏｍ ｔｏｍａｔｏ ｃＤＮＡ．ｗｈｉｃｈ ｃｏｎｔａｉｎｓ ａ １ ０５３ ｂｐ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｅｎｃｏｄｉｎｇ ３５１ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓ，ａｎｄ ｃｏｎｔａｉｎｓ ＮＡＣ ｄｏｍａｉｎ ｉｎ ｉｔｓ Ｎ ｔｅｒｍｉｎｕｓ．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＮＡＭ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｉｇｈｌｙ ｉｎ ａｌｌ ｔｉｓｓｕｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｒｏｏｔ，ｓｔｅｍ，ｌｅａｆ，ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ ｆｒｕｉｔ．Ｔｏ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｍａｔｏ ＮＡ Ｍ ｇｅｎｅ，ＮＡＭ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｐＬＰ一３５Ｓ—ＮＡＭ ｗａｓ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｔｏｍａｔｏ ｐｌａｎｔｓ ｂｙ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ＮＡＭ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ａ ｄｗａｒｆ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ．ｔｈｅ ｓｉｚｅ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｐｌａｎｔｓ ｗａｓ ｓｍａｌｌｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｗｉｌｄ－ｔｙｐｅ ｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｔｏｍａｔｏ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｌｙ ｌｏｂｅｄ ｓｈａｐｅｄ．Ｉｎ ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ，ＮＡＭ ａｆｆｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｏｔ ａｐｉｃａｌ ｍｅｒｉｓｔｅｍ（ＳＡＭ）ａｎｄ ｌｅａｆ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ ｔｏｍａｔｏ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｔｏｍａｔｏ；ＮＡ Ｍ；Ｃｌｏｎｅ；Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｄｏｉ １０．３９６９０．ｉｓｓｎ．１０００—２５６１．２０１２．０８．０２５ 植物转录因子是功能基因组学研究的一个重要 达［１］ Ｓｏｕｅｒ等囝在顶端分生组织和花器官发育研究 内容 ＮＡＣ转录因子是近年来新发现的具有多种 中发现矮牵牛ｎｕｒｎ一突变体不能形成顶端分生组织． 生物功能的植物特异转录因子．ＮＡＣ蛋白在Ｎ末 大多数植株在幼苗期便死亡．而少数未死亡的 端有一个高度保守的ＮＡＣ结构域，约由１５０个保 ｎａｍ一突变体花器官发育异常。Ｘｉｅ等『３］发现拟南芥 守的氨基酸残基组成．可结合ＤＮＡ和其它蛋白质： ＮＡ Ｃ１基因受生长素诱导且介导生长素信号以促进 Ｃ端是转录激活功能区，具有高度的多样性。ＮＡＣ 侧根发育．该转录因子可激活下游生长素相应靶基 转录因子家族成员众多．受植物不同发育期和多种 因ＤＢＰ和ＡＩＲ３的表达．过量表达该基因促进侧根 环境因素的诱导．同时受组织特异性的影响，可激 发育．反义表达则抑制侧根的发育。Ｇｕｏ等『４］发现 活特定的目的蛋白发挥生物学功能 ＮＡＣ转录因 拟南芥ＮＡＣ转录因子ＡｔＮＡＰ与叶片衰老相关，在 子成员ＮＡＭ、ＣＵＣ ／２侣、ＡｔＮＡＰ、ＡｔＮＡＣ１、ＳＮＤ 此基因内部插入一段Ｔ—ＤＮＡ．明显推迟叶片的衰 和 ＂ 等在植物生长发育中起调节作用．转录 老 除了参与植物生长发育的调控，ＮＡＣ转录因 调控植物的根、叶和花等器官与组织的相关基因表 子还参与胁迫应答 拟南芥Ａ 是干旱诱导基 收稿日期： ２０１２—０５—１２ 修回日期：２０１２—０８—０２ 基金项目： 教育部博士点基金项目（Ｎｏ．２０１１０１９１１１００２９）；国家自然科学基金项目（Ｎｏ．３０９７２００２；Ｎｏ．３１０７１７９８）；２０１０中央高校个人项目 （ＣＤＪＸＳ１０２３００１７）。 作者简介： 杨春文（１９８５年一），男，硕士研究生。研究方向：分子生物学。 通讯作者：李正国，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｇｕｏｌｉ＠ｅｑｕ．ｅｄｕ．ｃｎ。 第８期 杨春文等：番茄ＮＡＭ基因的克隆与遗传转化 －１４６１一 因．干旱和ＡＢＡ处理可导致４ 表达水平显著 环：７２℃７ ｍｉｎ 利用ＤＮＡＭＡＮ ６．０进行多序列比 提高［２１．而ＡｔＮＡＣ２在乙烯和生长素信号存在的条 件下。受盐胁迫的诱导ｒ６１．此外，刘旭等［ Ｊ发现花 生中ＡｈＮＡ Ｃ２和ＡｈＮＡ Ｃ３参与干旱和ＡＢＡ的信 号调节。 目前有关ＮＡＭ基因对番茄生长发育的功能了 解甚少 因此．本研究以番茄为材料．通过生物信 息学分析．从番茄数据库中筛选出１条ＮＡＭ ｃＤＮＡ序列．通过定量ＰＣＲ方法研究ＮＡＭ基因在 番茄中的表达模式．并构建超表达载体．通过农杆 菌介导法导人番茄中．获得转基因番茄．并对转基 因番茄的表型进行鉴定．为深入研究该基因的功能 奠定基础 １材料与方法 １．１材料 １．１．１植物材料及菌种 番茄ｆＳｏｌａｎＭ仇ｌｙｃｏｐｅｒｓｉ— ｃｕｍ，ＣＶ Ｍｉｃｒｏ Ｔｏｍ）、大肠杆菌ＪＭ１０９、农杆菌 （Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）菌株Ｃ５８和植物超表达载体 ｐＬＰ１００—３５Ｓ均由本实验室保存 １．１．２试剂Ｔ４ ＤＮＡ连接酶、限制性内切酶及 反转录试剂盒购自ＦｅｒｌＴｌｅｎｔａｓ公司（ＵＳＡ）．高保真 ＤＮＡ聚合酶购自ＴａＫａＲａ公司（大连），质粒提取试 剂盒购自ＢｉｏＦｌｕｘ公司（杭州），ＤＮＡ凝胶回收试剂 盒购自ＯＭＥＧＡ公司（ＵＳＡ）。总ＲＮＡ抽提试剂 Ｔｒｉｚ０ｌ购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司（ＵＳＡ），其它生化试剂购 白鼎国生物技术公司（北京），Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ所用 试剂Ｍａｘｉｍａ￣ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ／Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（２ｘ）购自Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司（ＵＳＡ），用于番茄组织 培养的ＭＳ培养基购自Ｓｉｇｍａ公司：所有引物合成 和测序＿丁作均由南京金斯瑞生物科技公司完成 １．２方法 １．２．１ 番茄ＮＡＭ基因的克隆及序列分析 根据 番茄基因数据库中ＮＡＭ的全长ｃＤＮＡ序列．利用 ｐｒｉｍｅｒ ５．０在开放阅读框的两侧设计扩增引物 ＮＡＭ—Ｆ和ＮＡＭ—Ｒ（见表１）。ＰＣＲ反应条件：９４℃ ５ ｍｉｎ；９４℃３０ Ｓ，５５℃３０ Ｓ。７２ ｏＣ ９０ Ｓ。３５个循 表１本研究所用的引物序列 引物名称 引物序列５＂－３ ＧＴＧＣＴＧＴＧ ＩＴＡＴＣＴＩＴｒＧＴＧＴＧ ＴＡＣＣＡＣＴＡＡＡＧＣＴＧＣＣＡＣＡＣＧ ＴＧＴＣＣＣＴＡ 几＿ｒＡＣＧＡＧＧＧ ＩＴｒＡＴＧＣ ＣＡＧ ＩＴＡＡＡＴＣＡＣＧＡＣＣＡＧＣＡＡＧＡＴ ＣＣＡＡＣＡＧＧＧＣＴＧＡＧＧＡＣＴＡＡ ＣＣＴＩＴｒＧＧＴＧＣＴＣＴＴＣＣＴＣＧ 对，ＭＥＧＡ ５．０构建系统进化树。 １．２．２组织表达模式分析Ｔｒｉｚ０ｌ法提取番茄各 组织／器官的总ＲＮＡ，ＯＤ２Ｍ２８ｏ＝１．８～２．０，以２ ｇ ＲＮＡ为模板．经ＤＮａｓｅ Ｉ消化３Ｏ ｍｉｎ后反转录合 成第一链ｃＤＮＡ（步骤参照说明书）：以引物ＱＰ— ＮＡＭ—Ｆ、ＯＰ—ＮＡＭ—Ｒ和Ｓ１一Ａｃｔｉｎ—Ｆ、Ｓ１一Ａｃｔｉｎ—Ｒ 分别扩增目标基因及内参基因．具体方法参照说 明书进行 定量ＲＴ—ＰＣＲ体系：按Ｍａｘｉｍａ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ／ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（２ｘ）１２．５ ｔｘＬ，引物各 ０．３／￣ｍｏｌ／Ｌ，ｃＤＮＡ≤５０ ｎｇ，加水至总体积２５ Ｌ。 为了确保结果的可靠性．每个反应设置３次重复。 ＰＣＲ程序设置为：５０℃２ ｍｉｎ；９５℃１０ ｍｉｎ； ９５℃１５ Ｓ，６０ ｏＣ ３０ Ｓ，７２ ｏＣ ３０ Ｓ，４２个循环； ９５ ｑＣ ３０ Ｓ ＰＣＲ扩增结束后立即进行熔解曲线分 析，以验证扩增的特异性。熔解曲线的程序为： ９ ５ ｃＣ １ ｍｉｎ；５５℃ｌ ｍｉｎ：从５５℃开始每升高 ０．５℃保持１０ Ｓ，连续升高８０次 数据处理：实时荧光定量ＰＣＲ反应完成后． ｉＣｙｅｌｅｒＴＭ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．０自动计算出各个板位的 ＣＴ，将ＣＴ值输入到Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００３中．按照 公式 Ｃ ＝［（Ｃ 一Ｇ ：）ｓａｍｐｌｅ Ａ一（Ｃ 斛一 Ｃ ）ｓｍａｐｌｅ Ｂ） 计算基因相对表达量，并绘制 柱形图。其中，Ｃ 表示目的基因的Ｃ 值， Ｃ 表示内参基因的ＣＴ值。以番茄Ａｃｔｉｎ为内 参，以野生番茄根中相应基因表达量设为１．０．每 个样品值来自于３个重复实验的平均值±标准差．ｔ 检验检测显著水平（ｐ＜０．０５） １．２．３ ＮＡＭ基因超表达载体的构建 以ＮＡＭ—Ｆ 和ＮＡＭ—Ｒ为引物．用高保真酶扩增番茄ＮＡＭ基 因 将ＮＡＭ基因插入到经ＳｍａＩ酶切的植物表达 载体ｐＬＰ１００—３５Ｓ中．通过菌落ＰＣＲ、酶切及测序 验证．筛选正向连接的植物超表达载体．并命名为 ｐＬＰＩＯ０—３５Ｓ—ＮＡＭ。 １．２．４番茄的遗传转化及转基因植株鉴定 将重 组质粒ｐＬＰ１００～３５Ｓ—ＮＡＭ通过冻融法导人农杆菌 Ｃ５８中．利用叶盘法转化番茄．使用１００ ｍｇ／Ｌ卡 那霉素进行筛选并将抗性植株移入温室培养 以具有卡那霉素抗性的番茄转化苗为材料．用 Ｔｒｉｚｏｌ法小量提取番茄叶片ＲＮＡ．以ＲＮＡ为模板． 反转录合成第一链ｃＤＮＡ．用引物ＯＰ—ＮＡＭ—Ｆ、 ＱＰ—ＮＡＭ—Ｒ和Ｓ１一Ａｃｔｉｎ—Ｆ、Ｓ１一Ａｃｔｉｎ—Ｒ分另０扩增 目标基因及内参基因．体系和数据处理参照１．２．２ １．２．５转基因植株表型鉴定 以相同时期野生型 第８期 杨春文等：番茄ＮＡＭ基因的克隆与遗传转化 —．１４６３．— Ｕ．１ ————— ＳＩＮＡＭ：番茄（ＮＰ＿００１２３４２５４．１）；ＳｔＮＡＭ：马铃薯（ＡＣＬ１４３７４．１）；ＡｔＮＡＭ：拟南芥 （Ｑ９ＺＮＵ２．１）；Ｐ．ｈｙＮＡＭ：矮牵牛（ＣＡＡ６３１０１．１）；ＡｔＢＮＡＭ：互叶梅（ＣＢＶ６５８３３．１）；ＰｓＮＡＭ１： 豌豆（ＡＣＬ１４３７２．１），ＰｓＮＡＭ２（ＡＣＩＪｌ４３７３．１）；ＭｔＮＡＭ：苜蓿（ＡＢＮ０８１９５．１）；ＭａＮＡＭ：小果野蕉 （ＡＢＦ６９９８６．１）；ＡｃＮＡＭ：蓝花耧斗菜（ＡＣＬ１４３６８．１）；ＳｂＮＡＭ：高粱（ＡＡＱ０６２６０．１）；ＯｓＮＡＭ： 水稻（ＡＡＭ７４２７１．１）；ＺｍＮＡＭ：玉米（ＡＡＱ０６２８４．１）。 图３ⅣＡＭ基因家族系统进化树 差异显著（ｐ＜０．０５）．而在果实中的表达差异不显著 构建了正义超表达载体ｐＬＰ１００—３５Ｓ—ＮＡＭ．并转入 （见图４）。 农杆菌Ｃ５８中．为番茄遗传转化奠定了基础 ２．３ ＮＡＭ基因植物表达载体的构建 利用超表达载体ＤＬＰ１Ｏ０—３５Ｓ—ＮＡＭ转化番茄 超表达和抑制表达是研究基因功能的重要方 获得１个转基因株系．对转基因植株进行定量分 法。为了进一步研究ＮＡＭ基因的功能．笔者们构 析。结果表明：与野生型植株相比，转基因植株 建了植物超表达载体 将ＰＣＲ产物连接到经Ｓｍ０ Ｉ ＮＡＭ基因超量表达，约为野生型的２４倍（见图５）。 酶切的ｐＬＰＩＯ０—３５Ｓ植物表达载体中，经ＰＣＲ及酶 ２．４转基因植株表型鉴定 切验证，表明ＮＡＭ基因已正确连接到载体上：测 本试验对获得的转基因番茄进行了表型鉴定． 序结果表明，基因序列及插入方向完全正确．成功 ６ 班 删 ３Ｏ ２０ 莨 薹 ｚ ｌＯ Ｏ Ｏ 根 茎 叶 花 红果 植株类型 １：野生型对照；２：转基因植株。 图４＾ 基因组织表达分析结果 图５转基因番茄植株的鉴定 ——１４６４－ 热带作物学报 第３３卷 与野生型相比，茎短，株高显著降低：叶片稍厚呈 暗绿色，叶边缘缺刻不明显。形态异常：植株的生 长和分生能力受到严重的抑制（图６），生长发育缓 慢，同期的野生型开花时。转基因番茄还未现花 蕾；植株衰老减缓，从移栽人温室至枯萎．共历时 （１６８￣５）ｄ，比野生型（９５￣５）ｄ延长了近７０ ｄ ｌ：３５Ｓ：ＮＡＭ植株；２：野生型植株。 图６超表达转ⅣＡＭ基因植株的表型 ３讨论与结论 ＮＡＣ转录因子是特异存在于植物中具有多种 生物功能的一类新型转录因子．目前在十多种植物 中克隆了ＮＡＣ基因．功能涉及植物生长发育、激 素调控及胁迫响应等重要方面［９１ 本研究从番茄中 克隆了Ｍ 基因．该基因ＯＲＦ全长为１ ０５３ ｂｐ． 编码３５１个氨基酸 该基因在各个组织中表达丰度 都比较高．推测该基因可能是植物生长发育所必须 的调控因子 通过构建超表达载体转化番茄．共获 得１个转基因株系，该植株叶片形态异常、植株矮 小、生长受到抑制：同时，本试验还构建了ＮＡＭ— Ｍ（４个碱基突变，氨基酸序列不变）超表达载体． 转化番茄．结果获得２个转基因株系．转基因植株 同样表现为叶片形态异常、植株矮小、生长缓慢且 明显受到抑制．因此推测ＮＡＭ基因可能抑制植物 顶端分生组织（ＳＡＭ）正常生长。 ＫＮＯＸ（Ｋｎｏｔｔｅｄ—ｌｉｋｅ Ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎ）基因主要维 持ＳＡＭ、调控叶片的起始和形态建成［１ｏ一１２］．研究结 果表明顶端分生组织由未分化的干细胞及其衍生物 构成．其中就包括发育成叶片等横向器官的原始细 胞．ＭＹＢ转录因子ＡＳ１（Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ Ｌｅａｖｅｓ１）和 ＫＮＯＸ基因的负性作用控制分生组织的维护和横向 器官的分化．ＫＮＯＸ基因负向调控ＡＳ１基因的表 达．而 Ｓ，基因又反过来负向调控其它ＫＮＯＸ基 因ｆ如ＫＮＡ ＴＩ和ＫＮＡ Ｔ２）．且正向调控ＬＯＢ （Ｌａｔｅｒａｌ Ｏｒｇａｎ Ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ）基因，进而调控横向器 官［１ ３Ｉ。同时研究还发现超表达ＫＮＯＸ，基因导致拟 南芥植株矮小、叶片高度羽裂、花器官异常（包括 雄蕊短小、肥厚）．花药稀少［１４－１５１ 在马铃薯中也发 现超表达Ｋｎｏｔｔｅｄ—Ｌｉｋｅ基因可减少赤霉素的积累． 进而影响植物营养器官的发育 ０ｌｓｅｎ等 证实在 拟南芥中．ＫＮＯＸ基因的表达受ＮＡＣ转录因子 ＣＵＣＩ和ＣＵＣ２的调控 因此．ＮＡＣ转录因子家族 可能主要通过调控 基因的表达来控制顶端 分生组织 本研究中ＮＡＭ基因超表达植株叶片形 态异常、植株矮小、生长受到抑制，其表型与 ＫＮＯＸ基因超表达植株表型类似．由此推测在番茄 中ＮＡＭ基因可能通过调控ＫＮＯＸ基因的表达来影 响植株生长和发育．但尚需进一步验证 目前．大多数ＮＡＣ转录因子的功能尚不太清 楚．分析ＮＡＣ基因在植物生长发育中的作用．对 阐明ＮＡＣ转录因子家族的功能具有重要意义 同 时．研究结果表明ＮＡＣ转录因子处于ＭＡＤＳ—ｂｏｘ 及生长素受体ＴＩＲ１的下游［３Ｉ１８］． 并且又调控 ＫＮＯＸ转录因子家族．因此研究ＮＡＣ与其它转录 因子的相互调控关系．能够加深人们对生物体调控 网络的认识．不断完善基因调控的途径 参考文献 【１】冶晓芳，唐益苗，高世庆，等．植物ＮＡＣ转录因子的研究进 展Ｉ Ｊ１．生物技术通报，２００９，１０（１）：１９—２５． ［２】Ｓｏｕｅｒ Ｅ，Ｈｏｕｗｅｌｉｎｇｅｎ Ｖ Ａ，Ｋｌｏｏｓ Ｄ，ｅｔ ．Ｔｈｅ ｎｏ ａｐｉｃａｌ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ｇｅｎｅ ｏｆ ｐｅｔｕｎｉａ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐａｔｔｅｒｎ ｆｏｎｎａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｍｂｒｙｏｓ ａｎｄ ｆｌｏｗｅｒｓ ａｎｄ ｉｓ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｔ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ａｎｄ ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌ ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，１９９６，６５（２）：１５９—１７０． ［３］Ｘｉｅ Ｑ，Ｆｍｇｉｓ Ｇ，Ｃｏｌｇａｎ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＮＡＣｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｅｓ ａｕｘｉｎ ｓｉｇｎａｌ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ＴＩＲ１ ｔｏ ｐｒｏｍｏｔｅ ｌａｔｅｒａｌ ｒｏｏｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，１４：３ ０２４— ３ ０３６． 【４］Ｇｕｏ Ｙ，Ｇａｎ Ｓ．ＡｔＮＡＰ，ａ ＮＡＣ ｆａｍｉｌｙ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ，ｈａｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｌｅａｆ ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ［Ｊｌ＿Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ， ２００６，４６（３）：６０１—６１２． ［５］Ｌｕ Ｐ Ｌ，Ｃｈｅｎ Ｎ Ｚ，Ａｎ Ｒ，ｅｔ ．Ａ ｎｏｖｅｌ ｄｒｏｕｇｈｔ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｇｅｎｅ，Ａ ＴＡ ＦＩ，ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ＮＡＣ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｎｅｇａｔｉｖｅｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｓｓ—ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００７，６３（２）：２８９— ３０５． 【６ Ｈｅ Ｘ Ｊ，Ｍｕ Ｒ Ｌ，Ｃａｏ Ｗ Ｈ，ｅｔ６］ ａ１．ＡｔＮＡＣ２，ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ ｏｆ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ａｎｄ ａｕｘｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ，ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｓａｌｔ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｎｄ ｌａｔｅｒａｌ ｒｏｏｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］． Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５，４４（６）：９０３—９１６． ｆ７】刘 旭，李 玲．花生ＮＡＣ转录因子ＡｈＮＡｃ２和ＡｈＮＡｃ３的克隆 及转录特征【ＪＪ．作物学报，２００９，３５（３）：５４１－５４５． 【８］Ｓｅｈｍｉｔｔｇｅｎ Ｔ Ｄ，Ｌｉｖａｋ Ｋ Ｊ．Ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ ｄａｔａ ｂｙ 第８期 杨春文等：番茄ＮＡＭ基因的克隆与遗传转化 —．１４６５—． ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ＣＴ ｍｅｔｈｏｄ【ＪＪ．Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００８，３（６） １ １０１一ｌ １０８． 【９］柳展基，邵凤霞，唐桂英 植物ＮＡＣ转录因子的结构功能 及其表达调控研究进展【Ｊ］ 西北植物学报，２００７，２７（９）： １ ９ｌ５～１ ９２０． ［１０］Ｌｏｎｇ Ｊ Ａ，Ｍｏａｎ Ｅ Ｉ，Ｍｅｄｆｏｒｄ Ｊ Ｉ，ｅｔ ｏ１．Ａ ｍｅｍｂｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ＫＮＯＴＴＥＤ ｃｌａｓｓ ｏｆ ｈｏｍｅｏｄｏｍａｉｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｅｎｃｏｄｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ＳＴＭ ｇｅｎｅ ｏｆ Ａ ｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ【Ｊｊ．Ｎａｔｕｒｅ，１９９６，３７９（ｉ）：６６－６９． ［１ １］Ｓｃｏｎｅｌｄ Ｓ，Ｍｕｒｒａｙ Ｊ Ａ Ｈ．ＫＮＯＸ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｎｊｃｂｅｓ『ＪＪ．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｊｏ】０ｇｙ，２００６，６０（５）：９２９－９４６． ［１２］Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂ Ｊ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ Ａ，Ｃｈｅｎ Ｊ Ｊ，ｅｔ ｏ１．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔＷＯ ｋｎｏｔｔｅｄ—ｌｉｋｅ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ ｔｏｍａｔｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９８，３６（３）：４１７—４２５． ［１３］Ｂｙｍｅ Ｍ Ｅ，Ｓｉｍｏｒｏｗｓｋｉ Ｊ，Ｍａｒｔｉｅｎｓｓｅｎ Ｒ Ａ．ＡＳＹＭＭＥＴＲＩＣ ＬＥＡＶＥＳ１ ｒｅｖｅａｌｓ ｋｎｏｘ ｇｅｎｅ ｒｅｄｕｎｄａｎｃｙ ｉｎ Ａ ｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］＿ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，１２９（１１）：１ ９５７—１ ９６５． ［１４］Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ Ｍ，Ｂｅｒｍｕｄｅｚ—ＬｏｇａｌｌＯ１ Ｃ Ｌ，Ｃｌａｎｃｙ Ｍ Ａ，ｅｔ ０１．Ａ ｓｔｒａｗｂｅｒｒｙ ＫＮＯＸ ｇｅｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｌｅａｆ，ｆｌｏｗｅｒ ａｎｄ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ａｒｃｈｉｔｅｃｔ【 ｕｒｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１１，６（９）：２４３６７５２．【 ［ ６ ７ ８ 【１５］Ｓｈａｎｉ Ｅ，Ｂｕｒｋｏ Ｙ，Ｂｅｎ—Ｙａａｋｏｖ Ｌ，ｅｔ ．Ｓｔａｇｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｏｌａｎｕｍ ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ ｌｅａｆ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｃｌａｓｓ １ ＫＮＯＴＦＥＤ１一ＬＩＫＥ ＨＯＭＥＯＢＯＸ ｐｒｏｔｅｉｎｓ【Ｊ］．Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌ， ２００９，２１：３ ０７８－３０９２． Ｒｏｓｉｎ Ｆ Ｍ，Ｈａｒｔ Ｊ Ｋ，Ｈｏｍｅｒ Ｈ Ｔ，ｅｔ ｏ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ ｋｎｏｔｔｅｄ－ｌｉｋｅ ｈｏｍｅｏｂｏｘ ｇｅｎｅ ｏｆ ｐｏｔａｔｏ ａｌｔｅｒｓ ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｂｙ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００３，１３２（１）：１０６—１１７． Ａｉｄａ Ｍ，Ｉｓｈｉｄａ Ｔ，Ｔａｓａｋａ Ｍ．Ｓｈｏｏｔ ａｐｉｃａｌ ｍｅｒｉｓｔｅｍ ａｎｄ ｃｏｔｙｌｅｄｏｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ Ａ ｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｅｍｂｒｙｏｇｅｎｅｓｉｓ： ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ＣＵＰ—ＳＨＡＰＥＤ ＣＯＴＹＬＥＤＯＮ ａｎｄ ＳＨＯＯＴ ＭＥＲＩＳＴＥＭＬＥＳＳ ｇｅｎｅｓ【Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，１９９９，１２６： １ ５６３－１ ５７ ｏ』 Ｓａｂｌｏｗｓｋｉ Ｒ Ｗ Ｍ，Ｍｅｙｅｒｏｗｉｔｚ Ｅ Ｍ．Ａ ｈｏｍｏｌｏｇ ｏｆ ＮＯ ＡＰＩＣＡＬ ＭＥＲＩＳＴＥＭ ｉＳ ａｎ ｉｍｍｅｄｉａｔｅ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｔｈｅ ｆｌｏｒａｌ ｈｏｍｅｏｔｉｃ ｇｅｎｅｓ ＡＰＥＴＡＬＡ３／ＰＩＳＴＩＬＬＡＴＡ叫．Ｃｅｌｌ，１９９８，９２ （１）：９３—１０３． 责任编辑：黄东杰
