乳酸测定方法

乳酸的测定：

对羟基联苯比色法(参照高庆， 2005)

1. 材料、试剂与仪器 无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试

剂。 主要溶液：

①钨酸溶液： L 硫酸及 10%(W/V)钨酸钠 (Na2WO4· 2H2O)溶液等体积混合，当天使用前配制； ②20%(W/V)硫酸铜溶液：称取硫酸铜 (CuSO4·5H2O) 20g，加蒸馏水 70ml ，加热使之溶解，再加入蒸馏 水定容至 100ml ；

③ 对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯溶于 100ml 的 L 氢氧化钠溶液中 ( 配制时加热助溶，溶解后为澄 清液体 ) ，贮存于棕色瓶中，保存于 4 ℃冰箱，可使用一个月；

④ 乳酸标准储存液 (1mg/ml) ：精确称取无水乳酸锂，溶于 50ml 蒸馏水中，加 L 硫酸 20ml ，后加蒸馏 水定容至

100ml ，混匀后保存于 4 ℃冰箱。

⑤ 4%(W/V)硫酸铜溶液： 20%硫酸铜溶液 10mL加蒸馏水稀释至 50mL。

⑥ 乳酸标准应用液 (200 μg/mL): 使用时取储存液 10mL用蒸馏水稀释至 50mL。在冰箱中可保存数天。 主要仪器：

UNIC UV-2100 紫外可见分光光度计、 TGL-16B 离心机、 恒温水浴锅、 具塞试管 5ml 及具塞比色管 20ml 。 2. 方法

青贮浸提液样品预处理

取适量青贮浸提液样品 5000r/min 离心 10min，取上清液适当稀释， 吸取稀释液于洁净离心管中， 加入 钨酸溶液，混匀，室温静置，直至溶液中出现明显絮状物(约

30～ 45min)，10000r/m 离心 10min，取

上清液置于 5ml 洁净具塞试管中， 60℃水浴保温 30min 左右，冷却待用。 标准曲线的制作

①用 200Lg/mL 乳酸应用标准液

同青贮样品浸提液预处理方法一样预处理后 ( 可以不稀释 ), 按下表数量在预先编好号的试管中加入标 准乳酸滤液和蒸馏水。

v1.0 可编辑可修改

②各管中分别加入氢氧化钙粉末 100mg,混匀 ,8000r/min 离心 5min, 取上清液 , 加入预先加有 20mg氢氧 化钙粉末的小试管中 , 混匀 , 加 20% 硫酸铜溶液 , 称重 , 迅速混匀 , 沸水浴 3min, 水浴冷却 , 补足重 量,3000r/min 离心 5min, 各吸上清液加入比色管中。 ③在各管加入 25μL的 4%硫酸铜溶液 ,混匀后置冰 水浴内冷却。 ④将预冷的浓硫酸缓缓加入各管中 ,每管各加,边加边摇 ,混匀后置沸水浴中准确加热 5min, 取出后迅速置冰水浴中冷却 3min 左右。⑤在各管中加 %对羟基联苯溶液 ,充分振摇后 ,放置, 其间每 10min 混摇一次。⑥各管置于沸水浴中准确加热 90s, 立即放入冰水浴中冷却。在波长 565nm 处用 lcm 比色皿 ,1 管作为参比 , 分别测定吸光度 (A) 。所得数据以乳酸含量为横坐标 , 以 565nm处的光吸收为纵坐 标, 作标准曲线。

青贮样品浸提液中乳酸含量的测定

取青贮样品浸提液滤液按标准曲线的测定方法 ,以蒸馏水为空白测定其在 560nm 处的光吸收 ,所得 数据在标准曲线上查得相应的乳酸含量 , 即为青贮样品浸提液中的乳酸含量。 样品中乳酸含量 =计算值×稀释倍数

需要试剂：

无水乳酸锂、对羟基联苯、钨酸钠、硫酸铜、氢氧化钙、浓硫酸、蔗糖、无水葡萄糖均为分析纯试剂。分光光度计、离心机、离心管、恒温水浴锅、具塞试管3

5ml 及具塞比色管 20ml。

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需要器材：