．１４６． 实验与捡验医学２０１４年４月第３２卷第２期Ｅｘｏｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ： ！垒 ！： ： ： ・实验研究・ 多重ＰＣＲ快速检测３种食源性致病菌 吴建英，宋建新，曹金萍，涂智杰，余慧宏，胡芹，魏建萍，潘剑 ｆ江西省景德镇市疾病预防控制中心，江西景德镇３３３０００１ 摘要：目的建立一种能同时检测金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌３种致病菌的多重ＰＣＲ检测方法 方法 采用ＬＢ培养液对金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌标准菌株进行增菌。根据金黄色葡萄球菌的ｎｕｃ基因、产单核 李斯特氏菌的ｈｌｙＡ基因、沙门氏菌的ｉｎｖＡ基因设计引物，通过多重聚合酶链反应ｆＰＣＲ１对上述３种食源性致病菌的目的基 因进行扩增，同时对反应体系进行优化。结果对平均浓度为５ｃｆｕ／ｍｌ的金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门氏菌在ＬＢ 培养液中进行８ｈ振荡培养，可以检出阳性结果；把金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌、沙门菌、志贺菌、蜡样芽孢杆菌、大肠 埃希菌Ｏ１５７、阪崎肠杆菌７种菌混合在一起提取混合基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，显示 很好的特异性结果。结论建立的 多重ＰＣＲ检测方法适用于金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌的快速检测，具有快速、简便、灵敏的特点，可广泛应 用于食品卫生检测、食物中毒应急处理和临床检验等领域 关键词：金黄色葡萄球菌：产单核李斯特菌：沙门菌：多重聚合酶链反应 中图分类号：Ｒ４４６．５ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４—１１２９（２０１４）０２—０１４６—０４ ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－１ １２９．２０１４．０２．０１５ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｆｏｏｄ－ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ＷＵ Ｊｉａｎｙｉｎｇ，ＳＯＮＧ Ｊｉａｎｘｉｎ，ＣＡ ０ Ｊｉｎｐｉｎｇ，ｅｔ ｏ１．Ｊｉｎｇｄｅｚｈｅｎ Ｃｅｎｔｅｒｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｊｉａｎｇｘｉ Ｊｉｎｇｄｅｚｈｅｎ ３３３０００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｓ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．ｉｎ ｆｏｏｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｓ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ，ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．ｗｅｒｅ ｅｎ— ｉｆｃｈｅｄ ｂｙ ＬＢ ｍｅｄｉｕｍ．Ｔｈｅ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｎｕｃ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｓ，ｈｌｙＡ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏ— ｇｅｎｓ ａｎｄ ｉｎｖＡ ｇｅｎｅ ｏｆ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅｓｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｆｏｏｄ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｉｆｅｄ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ．ｗｈｏｓｅ ｒｅａｃ— ｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｈａｄ ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｗｈｉｌｅ ｓｅｖｅｎ ｋｉｎｄｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ ＤＮＡ ｗｅｒｅ ｍｉｘｅｄ ｉｎ ｏｎｅ ＰＣＲ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｕｂｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ５ ｃｆｕ／ｍｌ ｏｒ Ｓｔｆｏｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｓ，Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ ａｎｄ Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ，ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｒａｐｉｄ， ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｎｄ ｈａｄ ｈｉｇｈ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ｆｉｅｌｄｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｆｏｏｄ ｓａｎｉｔａｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｆｏｏｄｂｏｒｎｅ ｉｌｌｎｅｓｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｌｉｎｉ— ｃａｌ ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｏＭ￣Ｆｅｓ；Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ；Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｓｐｐ；Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ 食品中污染的病原菌是引起食源性疾病的主 要因素之一 金黄色葡萄球菌ｆＳｔａｐｈｙｌＯＣＯＣＣＵＳ ａｕ— ｒｅｓ１、产单核李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｓ）和沙门 菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌ０ ｓＰＰ１是肉与肉制品、乳与乳制品、水 产品、冷冻饮料与饮料、调味品【ｌＪ等都需要检测的３ 种食源性致病菌 目前对这些食源性致病菌的检 效、简便的多重ＰＣＲ检测方法。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１菌株实验所用菌株共７株．分别为金黄色 葡萄球菌ｆＡＴＣＣ２９２１３１、产单核李斯特菌ｆＣＭ． ＣＣ５４００４）、沙门菌（Ｈ９８１２）、志贺菌（ＡＴＣＣ１０４１２）、蜡 样芽孢杆菌ｆＣＭＣＣ（Ｂ）６３３０３）、大肠埃希菌Ｏ１５７ 测．主要还是按照传统的细菌学培养方法．一般需 ３～７ｄ．操作繁琐．耗时费力…。因此急需建立快速有 效的检测方法 本研究通过使用ＬＢ培养液进行８ｈ振荡培养 增菌与优化多重ＰＣＲ反应体系，建立一种低廉、高 基金项目：景德镇市科研项目（ｓｆ２０１１３６３１１ 作者简介：吴建英，女，１９６５年出生，主管技师，主要从事食品 安全微生物检验。 通信作者：涂智杰，男，１９８１年出生，硕士，主要从事食品安全 微生物检验。 （ＡＴＣＣ４３８８８）、阪崎肠杆菌（ＡＴＣＣ２９５４４）。所有菌株 均为本实验室保藏菌株 １．１．２培养基ＬＢ培养液组成成份胰蛋白胨１０ｇ／ Ｌ、酵母提取物５ｇ／Ｌ、ＮａＣ１ １０ｇ／Ｌ，使用ｌｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ调ｐＨ至７．０。 １．１－３试剂及仪器Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ、ＭｇＣ１２、 １０ ｘＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ、ＰＣＲ回收试剂盒、ＤＬ２０００ ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ购于北京天根生化科技有限公司：琼脂糖 塞堕 堕医堂２Ｑ！垒生 旦笙 ２鲞笙２塑 Ｐ 垦趟 墨 Ｑ望！Ｑ 丛 ￡， 卫！：２ 生 ！：３ ： ： ・１４７・ 为西班牙ＢｉｏＷｅｓｔ公司产品：溴化乙锭ｆＥＢ１为美国 １．２方法 ＳｉｇＩＴＩａ公司产品：引物由上海生工合成。ＰＴＣ～２００ １．２１引物设计根据金黄色葡萄球菌编码耐热核 ＰＣＲ仪为美国ＭＪ公司产品：ＤＹＹ一６Ｃ电泳仪为北 酸酶基因ｎｕｃ【２Ｊ、产单核李斯特菌特异溶血素基因 京六一仪器厂生产：ＧｅｌＤｏｃ ２０００凝胶成像系统为 ｈｌｙＡｔ３￣、沙门菌编码侵染上皮细胞表面蛋白的ｉｎｖＡ 美国Ｂｉｏ—Ｒａｄ公司生产：ＬＥＧＥＮＤ ＭＩＣＲＯ ２１Ｃｅｎ— 基因［４１设计了３对引物１ｆ表１１。以３种标准菌株 ｔｒｉｆｕｇｅ高速离心机为美国Ｔｈｅｒｉｎ０ Ｓｃｉｅｎｔｉｉｆｃ公司生 ＤＮＡ为模板．ＰＣＲ扩增后使用ＰＣＲ回收试剂盒 产：ＦＬＹ一２１１Ｂ恒温摇床 回收扩增片段送至捷瑞公司进行测序验证 表１金黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌、沙门菌多重ＰＣＲ反应引物序列 ． １．２．２ ＤＮＡ模板的制备将７株保藏菌株按照不 和６４０的ｈｌｙＡ引物进行双重ＰＣＲ．确定ｈｌｖＡ引物 同组合方式接种于５ｍｌ ＬＢ培养液中．３７℃振荡培 的最佳浓度 养。取菌液１００￣ｌ置于离心管中，１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １．２．４．３ ｎｕｃ引物浓度的优化用最佳浓度ｉｎｖＡ和 １０ｍｉｎ后．弃上清。收集菌体，加ｌｍｌ １ｘＴＥ洗涤１ ｈｌｙＡ引物与浓度（ｎｍｏｌ／Ｌ）１０、２０、４０、８０、１６０、３２０和 次，然后以５０ ｌ ０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ悬浮菌体，沸水浴 ６４０的ｎｕｃ引物进行三重ＰＣＲ．确定ｎｕｃ引物的最 加热５ｍｉｎ，迅速冷却后加入５０ｔｘｌ ｌｍｏｌ／Ｌ ｐＨ ８．０的 佳浓度 Ｔｒｉｓ—ＨＣ１缓冲液．充分混匀．１２０００ｒ／ｍｉｎ离心 １．２．５多重ＰＣＲ检测ＬＢ培养液中的病原菌将金 ５ｍｉｎ．上清即为ＤＮＡ模板［５１ 黄色葡萄球菌、产单核李斯特菌和沙门菌的纯培 １．２．３引物特异性实验 以表１的３对引物分别 养物分别、同时或与其他菌（包括志贺菌、大肠埃希 对７株实验菌株的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增以验证引 菌０１５７、蜡样芽孢杆菌、阪崎肠杆菌１接种于ＬＢ培 物的特异性。ＰＣＲ反应条件：９４ｃＩ＝预变性５ｍｉｎ： 养液中，混匀。所有菌的接种量均为平均５ｃｆｕ／ｍｌ。 ９４℃变性３０ｓ，５５℃退火３０ｓ，７２℃延伸３０ｓ，进行３５ 采用建立的ＰＣＲ方法进行检测 个循环：最后７２ｃＣ延伸１０ｍｉｎ。ＰＣＲ反应体系 ２结果 （２０ｔｘ１）：１０ｘＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ２ ｌ，Ｍｇ 浓度２．０ｍｍｏｌ／Ｌ，２．５ ２．１引物特异性 采用表１的３对引物对７株实 ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ ２．Ｏ ｌ，１０ ｍｍｏｌ／Ｌ引物０．５１ｘｌ，ＤＮＡ 验菌株进行ＰＣＲ扩增．以分析引物的特异性．结果 模板１Ｉｘｌ，５Ｕ／Ｉｘｌ Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶０．３ ｌ，加ｄｄＨ２０ 显示．３对引物扩增目的产物测序后与预期结果一 补足２０ｐＡ。ＰＣＲ产物检测：取５ｔｘｌ ＰＣＲ产物加溴酚 致，而且本实验所设计的引物特异性良好。 蓝混匀．以ＤＬ２０００ Ｍａｒｋｅｒ作参照。在１．５％琼脂糖 表２引物特异性实验结果 凝胶ｆ含ＥＢ ０．５１ｘｇ／ｍ１）Ｏ０，１００Ｖ电泳，于凝胶成像系 统中观察结果 １．２．４多重ＰＣＲ引物浓度的优化 １．２．４．１ ｉｎｖＡ引物浓度的优化ＰＣＲ反应体系．除 了混合ＤＮＡ模板ｆ金黄色葡萄球菌ＡＴＣＣ２９２１３、沙 门菌Ｈ９８１２、产单核李斯特菌ＣＭＣＣ５４ｏ０４）１ ｌ，以 及ｉｎｖＡ引物浓度（ｎｍｏｌ／Ｌ）分别为ｌ０、２０、４０、８Ｏ、 １６０、３２０和６４０外，其他物质的含量和ＰＣＲ的反 应条件不变 ２．２多重ＰＣＲ引物浓度的确定按照沙门菌、产单 １．２＿４．２ ｈｌｙＡ引物浓度的优化以获得的最佳浓度 核李斯特菌和金黄色葡萄球菌的顺序对检测基因 的ｉｎｖＡ引物与浓度ｆｎｍｏｌ／Ｌ）１０、２０、４０、８０、１６０、３２０ 进行多重ＰＣＲ的引物浓度进行优化［５１。 实验与检验医学２０１４年４月第３２卷第２期ＥｘＤｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＡＤｒ．２０１４，Ｖｏ１．３２。Ｎｏ．２ ・１４９・ 扩增引物能够达到预期结果 重ＰＣＲ检测具有简便、快速、经济。具有较好的应 本实验引物扩增的产物大小分别为 用前景 本研究采用碱煮沸法提取ＤＮＡ模板．解决了 ｎｕｃ１２７ｂｐ、ｈｌｙＡ ２１７ｂｐ，ｉｎｖＡ４８０ｂｐ，由于产物越大所 消耗的ＰＣＲ反应管内的ｄＮＴＰ消耗就越多．一旦 ｄＮＴＰ消耗完毕ＰＣＲ反应立即停止．因此本实验从 大产物的引物浓度开始优化。研究结果表明．扩增 革兰阳性菌在沸水中破壁效果差的问题 由于碱 煮沸法对试剂要求简单．并且提取步骤少．很适合 基层医疗单位处理食物中毒病原微生物的定性检 测。同时采用ＬＢ培养液对金黄色葡萄球菌、产单 核李斯特菌和沙门菌进行增菌并获得较好的增菌 产物越大的引物使用浓度越小．可以减少其大量 消耗ｄＮＴＰ：而扩增产物较小的引物由于扩增效率 高．如果其引物浓度过大．扩增产物大的引物甚至 扩增不出产物 因此最终确定以金黄色葡萄球菌 效果。也有人报道称直接从样本中富集菌体进行 ＰＣＲ．这样检测结果假阳性的风险加大．同时不能 区分死菌与活菌．而增菌后检测可以解决上述问 题。 参考文献 ｆ１］卫生部：中华人民共和国国家标准，食品微生物学检验 ．北京： 中国标准出版社．２００３ ｎｕｃ基因、产单核李斯特菌ｈｌｖＡ基因和沙门菌ｉｎ． ｖＡ基因设计引物．浓度分别为１６０、８０和４０ｎｍｏｌ／Ｌ 为实验的最佳浓度 为了验证此种方法检测的灵敏度．本实验室 使用ＬＢ培养液对金黄色葡萄球菌、产单核李斯特 菌、沙门菌、志贺菌、蜡样芽孢杆菌、大肠埃希菌 Ｏ１５７和阪崎肠杆菌７种菌采用不同组合方式进行 振荡培养增菌．增菌时问为８ｈ 增菌后采用碱煮沸 法提取ＤＮＡ，以金黄色葡萄球菌ｎｕｃ基因、产单核 李斯特菌ｈｌｖＡ基因和沙门菌ｉｎｖＡ基因设计的特 【２］Ｂｒａｋｓｔａｄ ＯＧ，Ａａｓｂａｋｋ Ｋ，Ｍａｅｌａｎｄ ＪＡ．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｂｙ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ａｍｐｌｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅｎｕｅｇｅｎｅ 们．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９２，３Ｏ（７）：１６５４－１６６０． ［３】张晓峰，李爱云，方维焕，等．多重聚合酶链反应鉴别单核细胞增生 李斯特菌的研究叨．中华检验医学杂志，２００３，２６（２）：９３—９５． ［４】许一平，邵彦春，陈福生，等．沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌 异引物，浓度分别为１６０、８０和４０ｎｍｏｌ／Ｌ时，对其 进行扩增．结果显示本实验的检出限为５ｃ ＩＩｌ１．而 的多重ＰＣＲ检测『Ｊ１．微生物学通报，２００６，３３（６）：８９—９４． 【５］李博，陈福生，王小红，等．多重ＰＣＲ检测食品中的金黄色葡萄球 菌、志贺菌和沙门菌ＩＪ１．卫生研究，２００８，３７（４）：４３８—４４２． 【６］杨平，杨迎伍，陈伟，等．食品中４种致病微生物的多重ＰＣＲ快速 有些相关文献显示能够达到ｌｃｆｕ／ｍｌ的检出限．可 能是因为其提取方法的不同引起的．但此法具有 简单．不需要特殊耗材．整个检测过程少于１２ｈ等 检测技术研究［Ｊｌ１．西南大学学报（自然科学版），２００７，２９（５）：９０— ９４． 优 ［７１ 而传统细菌学方法需要使用不同的增菌液 对可疑物进行一次增菌，二次增菌．分离培养，生 化反应等一系列繁杂操作才能得出结果 因此多 ［７】多重ＰＣＰｄ￣向线点杂交（ＲＬＢ）检测细菌性脑膜炎病原体的研究 ［Ｊ］．实验与检验医学，２０１１，２９（４）：３４７—３４９． （收稿日期２０１３—１１－ｌ１；收回日期２０１４—０１—０７） （上接第１３８页１ＭＤＬ在临床检验结果的解释过程中 的有着十分重要的地位．因此选择ＭＤＬ作为试验 样本浓度的临床意义是不言而喻的 本研究结果显示我科自建检测系统测定血清 总蛋白在低值ＭＤＬ的ＣＶ～ＣＶ ＣＶ 分别为 ０．８６％、１．３７％、２．３１％，ＥＵ为５．６４％；在高值ＭＤＬ 不确定度评估更好地应用于临床 参考文献 『１１中国合格评定国家认可委员会．ＩＳ０１５１８９医学实验室质量和能 力认可准则［Ｓ】．北京：中国合格评定国家认可委员会，２００７． ［２］Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ．ＩＳＯ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ ｉｎ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ［Ｓ］．Ｇｅｎｅｖａ：ＩＳＯ，１９９５． 『３１陈丽．罗氏电化学发光检测血清肿瘤标志物测量不确定度的测 的ＣＶ ＣＶＢ、ＣＶⅨ 分别为０．７４％、１．４１％、３．２９％， ＥＵ为７．３１％ 由于目前临床上暂未对各个检验项 目的ＥＵ作出明确要求．因此在解释本研究结果时 我们难以作出定论 尽管如此．在日常工作过程 定［Ｊ】．实验与检验医学，２０１ １，９（５）：５０１—５０２． 『４１梅敏，李海珠，帅虎．血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶测定分析中的 测量不确定度评定［Ｊ１．实验与检验医学，２０１０，２８（４）：３７１—３７２，３９４． 【５］Ｇｕｅｒｒａｓｉｏ Ｒ，Ｈａｂｅｒｈａｕｅｒ－Ｔｒｏｙｅｒ Ｃ，Ｓｔｅｉｇｅｒ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｕｎｃｅｒｔａｉｎｔｙ ｏｆ ｉｓｏｔｏｐｏｌｏｇｕｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｆｌｕｘｏｍｉｃｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｖｉａ 中，如果我们狠抓分析前质量控制．严格控制其他 原因的不确定度．这样就可以最大限度地缩小测 量不确定度评估试验得到的理论ＥＵ值与实际ＥＵ 值的差距．此时本方法得到的试验结果可以准确 地反映ｌ临床检验结果的分散性．从而有利于测量 ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ａｎａｌ Ｂｉｏａｎａｌ Ｃｈｅｍ，２０１３，４０５（１５）：５１３３－ ５１４６． ［６】谢华斌，盛楠，林永志，等医学实验室电化学发光分析系统测量不 确定度评价［Ｊ】．国际检验医学杂志，２０１３，３４（１）：８５—８７． （收稿日期２０１３—１０—３０；收回日期２０１３—１ １－１５）
