血清总脂含量的测定实验报告

一、实验目的

1.掌握香草醛法测定总脂的原理和方法； 2.了解正常动物正常的血清总脂含量。

二、实验原理

1.血清总脂指血清中各种脂类的总和。测定方法有称量法，比色法等。本实验采用的香草醛法，属于常用的比色法。

2.血清中的脂类，尤其是不饱和脂类与浓硫酸共热作用，经水解后生成碳正离子。试剂中的香草醛与浓磷酸的羟基作用生成芳香族的磷酸脂，由于改变了香草醛分子中的电子分配，使醛基变成活泼的羰基。此羰基可与碳正离子起反应，生成红色的醌化合物，其强度与碳正离子成正比。反应式略

三、实验仪器与试剂

6mg/ml胆固醇标准液，显色剂，浓硫酸，浓磷酸

四、实验步骤

取4支洁净试管

编号 空白管 标准管 测定管1 测定管2 血清 － － 0.02 0.02 标准液 － 0.02 － － 浓硫酸 1.0 1.0 1.0 1.0 充分混匀，放置沸水浴中10min，使脂类水解，冷水冷却 向各管中均加入显色剂4.0ml，搅匀 放置20min后，在525nm波长处比色，以空白管调节“0”点，分别读取各管吸光度。 五、实验结果玌分析

血清总脂含量（mg/ml）=（测定管吸光度/标准管吸光度）*胆固醇标准液

空白管 标准管 测定管1 测定管2 测定读数： 0.000 0.994 0.479 0.449 血清总脂含量（mg/ml）＝（0.479+0.449）/(2*0.994)*6（mg/ml）=2.8（mg/ml） 分析：正常的动物血清总脂含量约在5~8（mg/ml）。

本实验所求得的血清总脂含量为2.8（mg/ml），在正常值范围外，造成误差的原因可能是：

① 取0.02ml血清样品时，没有摇匀，导致血清中的总脂含量不均匀，就在提取前摇匀；

② 本实验中采用胆固醇作标准的测定方法本身存在误差，导致最后测量存在误差； ③ 加入浓硫酸时，每组把握滴定的速度不同，可能有些组放置过快，导致试剂过多附着于管壁而造成误差，所以实验时就缓慢滴加浓硫酸；

④ 不同仪器存在误差，同时把样品放入比色皿时，也要摇匀，减少误差。 六、思考题

1.何谓总脂？测定总脂有何意义？

答：血清总脂指血清中各种脂类的总和，包括饱和和不饱和脂类。

意义：脂类是动物体中重要的营养之一，可为动物体提供必须的各种脂类，如脂肪酸，同时，也是热源的来源之一。脂类还是脂溶性维生素的良好溶剂，有利于动物体对维生素的吸收。最后脂类也可和蛋白质结合，构成脂蛋白，有利于动物生理方面的调节。因此，根据脂类的作用，可用于：

① 测定总脂的含量，可以对动物体生理情况进行监察，有利于人类圣动物疾病的预防； ② 通过测定含量，可以评价动物体的营养情况，判断肉类品质，从而对动物饲料进行调节，适当添加各种必须脂类。另外，还可以通过测量，调整动物喂养方式，提高生产效率。 2.显色后为什么要放置20min放置的目的是什么？ 答：显色后放置20min是因为要使反应达到最佳状态。

20min后，正好反应完全，显色稳定，达到测量的最佳时间，从而减少了误差。