GE离子交换层析柱 protocol

GE离子交换层析柱 protocol 5ml（举例子）

Preparation

1. Buffer:

（pH 根据蛋白的 pI 进行调整，pH 尽量远离 pI。pH>pI,过 Q 柱；pH>pI,过 S 柱）

A: 50mM Tris-HCl pH8.0

B: 50mM Tris-HCl pH8.0 1M NaCl

0.22um 过滤除杂质，4℃静置过夜除气泡。

2. Protein:

用 0.22um 滤器过滤除质；或者分装于 1.5ml EP 管，14000rpm，4℃离心 20min，去除 沉淀。

3 .Prepare enough tubes

有流速时，禁止将泵的探头暴露到空气中!!! 柱子在仪器上时，无论何时均要限压!!!

Procedure

1 打开仪器总开关，电脑。

检查：泵的探头是否放入纯水中。

洗泵：Manual--pump--pump basic wash--A on ,B on--insert--execute

洗系统：Manual--pump--flow--10ml/min--insert--execute

Manual--other--End time--volume--40 ml

2 安装柱子

给流速：Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute(仪器显示系统压力为*Mpa)

限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--(0.3+*)Mpa--insert--

execute(0.3Mpa 是 Hitrap Q

柱子的最大限压)

装柱子：先装上面，再下面，装完后用纸巾擦干，观察是否漏液。

3 清洗柱子

限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute

给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute（低流速下装柱子）

Manual--other--End time--volume--10 ml

（第一次使用的新柱子或者装有乙醇的柱子，必须先用纯水洗 1.5CV 以上。CV：柱体积，

其中 Hitrap Q HP5ml 的 CV 是 5ml） 停流速：End

装溶液：将 A 泵放入 buffer A, 将 B 泵放入 buffer B。（必须在零流速下操作） 限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute 低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

清洗至基线走平（大约需要 20ml） 高盐洗：Manual--pump--gradient--100%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

清洗至基线走到平

低盐洗：Manual--pump--gradient--0%B--insert--execute Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute 清洗至基线走平

停流速：End

4 上样品

选择合适的上样环，例如 5ml loop.

用纯水清洗 loop 三次，再用 buffer A 清洗 loop 三次，赶走气泡；同时清洗上样口。

将样品置于上样口，用针筒抽吸样品进入 loop。（切忌吸入气泡）

5 运行程序

File--设定的程序--show detail--确认无误--START。 特别注意更改压力，上 样量大小。

6 清洗柱子（同 3）

限压力（勿忘）--低盐洗--高盐洗--低盐洗 最后还要用水洗柱子。

停流速：End

装溶液：将 A 泵，B 泵用水清洗后，放入纯水中。（必须在零流速下操作）Manual--pump—gr adient--0%B--insert--execute

Manual--pump--flow--3ml/min--insert--execute

水洗：

清洗 至基线 走平

7 卸 柱子

限压力：Manual--Alarms--Alarms pressure--(0.3+*)Mpa--insert--execute(0.3Mpa 是 Hitrap Q

柱子的最大限压，*：系统压力)

给流速：Manual--pump--flow--1ml/min--insert--execute

卸柱子：先卸下面 ，再卸上面，卸下的柱子置于 4℃保存。（低流速下卸柱子）