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HPLC法测定清热止带颗粒中盐酸小檗碱的含量

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贵州科学33(1):14—16,2015 Guizhou Science H PLC法测 定洁执 匕,月7 止带颗粒中盐酸小檗碱的含量 胡奇志 于浩 张秀 杨道斌 吴家红 胡成刚 (贵阳中医学院,贵阳摘550002) 要: 该方法建立清热止带颗粒含量测定方法。本文选用了高效液相色谱法(HPLC),Agilent Cl8分析柱(4.6x250 mm,5 Ixm);流动相:乙腈一0.05 mol・L 三乙胺溶液(用磷酸调pH至3.0)(25:75);检测波长:345 nm;流速:1.0 m1.min~。盐酸小 檗碱在0.408—1.836 txg之间线性关系良好,r:0.999 5(n=6),平均回收率为97.7%,RSD=1.6l%(n:6)。该方法简便、灵 敏度高、重现性好,可作为该制剂的质量控制方法的参考依据。 关键词: 清热止带颗粒,盐酸小檗碱,HPLC,质量控制 中图分类号R 932.11 文献标识码A 文章编号1003—6563(2015)01—0014—03 HPLC Method for Measuring Berberine Bydrochloridein in QingreZhidai Grand YU Qi-Zhi YU Hao ZHANG Xiu YANG Dao-bain WU Jia-hong HU Cheng gang Abstract: A method is built to measure Berberine Bydrochl0ridein in QingreZhidai granule by using high efficien— cy liquid chromatography(HPLC),agilent C 1 8 column(4.6×250 lIlIn,5 m),mobile phase:acetonitrile -0.05tool・L three triethylamine solution(adjusted to pH 3 with phosphoric acid)(25:75),the detection wave— length:345 nm.Flow rate:1.0ml・min~.In 0.408~1.836 Ixg,berberine hydrochloride has good linear relationship with them(r=0.999 5(n:6))and average recovery rate(97.7%,RSD=1.61%(n=6)).The method is simple, high sensitivity and good reproducibility. Key words: QingreZhidai granule,berberine hydrochloride,HPL 清热止带颗粒来源于临床治疗妇科带证经验 家药典委员会,2010)。本研究结果表明,该检测方 方,系贵阳市科技局基金资助研究项目。该制剂由 白花蛇舌草、黄柏、苍术等药味组成,实验研究表明 该制剂对小鼠血液流变学及炎症模型的改善有较 法可为清热止带颗粒的质量标准研究提供一定的 参考依据。 好的效果,为进一步控制清热止带颗粒的质量,建 立清热止带颗粒含量测定方法,本研究首次选取该 1材料与试剂 1。1材料与仪器 制剂的主药黄柏的有效成分盐酸小檗碱为指标,按 照高效液相测定法进行含量测定和方法学研究(国 收稿日期:2014-09-09;修回日期:2014—09-12 日本岛津LC一20AT高效液相色谱仪、检测器; 电子天平(上海梅特勒有限公司,型号:AE240);水 系针筒过滤器(0.45 m上海兴亚净化材料厂);容 量瓶等普通玻璃器皿等。 1.2试剂与药品 基金项目:贵阳市科技计划项目(项目合同编号:筑科合同[2011204]14号) 作者简介:胡奇志(1969-),男,硕士,副教授。研究方向:药品开发、药 事管理教学和科研。E-mail:liihu2005@&iyun.toni. 通讯作者:吴家红(1962-),女,学士,高级实验师。研究方向:实验教学 及民族医药研究。 乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、三乙胺、磷酸、 1期 胡奇志,等:HPLC法测定清热止带颗粒中盐酸小檗碱的含量 15 水为哇哈哈纯净水;清热止带颗粒(批号: 2013102701,2013111106);盐酸小檗碱(中国药品 生物制品鉴定所,批号:110713—200911按含C∞H C1NO 为86.8%计)。 2方法与结果 2.1 色谱条件 (1)色谱柱:Agilent(C18,4.6x250 mm,5 m); (2)流动相:乙腈.0.05 mol/L三乙胺溶液(用磷酸 调PH至3.0)(25:75),检测波长:345 nm;(3)流 速:1.0 ml/min;(4)柱温:室温,理论塔板数按盐酸 小檗碱峰计算不低于3 000,进样量:10 l。 2.2溶液制备 2.2.1供试品溶液制备 取本品约4 g,研细,精密称定,置具塞锥形瓶 中,精密加入甲醇50 ml,称定重量,超声处理45 S, 放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀, 滤过,取0.45 m微孔滤膜过滤的续滤液,即得。 2.2.2对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量,加甲醇制成 每1 ml中约含0.102 mg的溶液,用0.45 m微孔 滤膜过滤,即得。 2.2.3空白对照品溶液制备 按处方的比例和制法,制成缺黄柏的阴性对照 样品取4 g,按2.2.1供试品溶液的制备方法,制成 空白对照溶液。 2.3专属性实验 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液、供试品溶 液、阴性样品溶液10 】分别注人色谱仪测定,得到 3张HPLC色谱图,见图1,该制剂其他成分对盐酸 小檗碱测定无干扰。 2.4线性关系考察 分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液4、6、10、 12、16、18 l以峰面积(Y)为纵坐标,以进样量( , g)为横坐标,绘制标准曲线,结果表明盐酸小檗碱 在0.408~1.836 Ixg范围内线性关系良好,回归方 程为Y=476 944x一365 183,r=0.999 5。 2.5精密度试验 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液10 l,重复进 样6次,分别测定,计算含量值,RSD为1.77%。 2.6稳定性试验 精密吸取供试品溶液10 1分别于0、2、6、12、 f I l I I 『、 l¨ {『1 J/ \、~  JA盐酸小檗碱对照溶液色谱图 ’1 九 I 八 { \ h~ /\ B供试品溶液色谱图 n 4 C空白对照溶液色谱图 图1专属性实验色谱图 Fig.1 Specificity of HPLC chromatography 20 h测定其含量,考察供试品溶液的稳定性,实验结 果RDS为1.71%,结果表明供试品在20 h内稳定。 2.7重复性试验 平行精密称取同一个批次本颗粒样品6份,每 份约为0.5 g,精密加甲醇5 ml,按供试品溶液制备 方法处理,依上述色谱条件进样l0 1,测定并计算 含量,RSD为1.33%,结果见表1。 2.8回收率试验 精密称取6份同一批次供试品颗粒,再分别精 确加入一定量的盐酸小檗碱对照品,按照2.2.1方 法制备、测定含量,计算回收率和RSD,平均回收率 为97.7,RSD为1.61%,结果见表2。 2.9样品测定试验 精密称取10批样品,按照2.2.1方法制备、分 别进样lO l测定含量,计算样品盐酸小檗碱含量, 结果10个批次样品含盐酸小檗碱均不低于 1.1 mg/g,按照含量测定限度设定方法,清热止带颗 粒含量限度检测暂定:样品含盐酸小檗碱不低于 0.9 mg/g。试验结果见表3。 l6 费 埘 科 学 33卷 表2样品加样回收率试验结果("13=6) Tab.2 Recovery results of berberine hydrochloride(n=6) 指标,基本符合该制剂临床疗效指向的要求(胡俊 3讨论 1)处方组成黄柏是中医临床作为清下焦湿热 青等,2009); 2)杨志晶、卢蕾等分别建立个从其他制剂中测 量盐酸小檗碱的质量控制方法(杨志晶等,2009;卢 蕾,2010),目前国内对黄柏的有效成分盐酸小檗碱 的研究比较透彻,盐酸小檗碱含量测定方法成熟, 药典黄柏项下也以其为含量测定项目(国家药典委 员会,2010)。根据薄层色谱法鉴别的结果,本品中 盐酸小檗碱的黄柏阴性对照无干扰,选取该成分为 的常用药味,盐酸小檗碱作为其有效成分,近年研 究较多,胡俊青、胡晓的报告认为,含小檗碱、药根 碱、木兰花碱、黄柏碱、掌叶防己碱等生物碱,及黄 柏酮、黄柏内醑、7一脱氢豆甾醇,其中盐酸小檗碱含 量最高可达到5.8%;黄柏具有广泛的临床作用,可 抑制DNFB诱导的小鼠DTH,降低其血清IFN一 水 含量控制的指标能取得较好的试验效果; 平,抑制其产生ILl及TNF.Ot,抑制其脾细胞产生 IL2,说明具有抑制免疫反应,减轻炎症损伤的作用。 本文选用盐酸小檗碱作为清热止带颗粒含量控制 3)从实验结果看,本检测方法精密度高,准确 度、重复性都比较好。操作简便、快捷,可作为清热 止带颗粒的质量控制方法的参考。(下转第29页) 胡 松,等:基于ANSYS的石膏空腔模无梁楼盖拓扑优化设计 元梁楼盖进行拓扑优化后,楼盖体积明显减小,重 29 on phosphorus gypsum evacuated mould floor without beam 量大大减轻,优化效率高。因此,基于ANSYS的拓 扑优化具有较强的优越性,能为后期结构优化设计 提供方向; [J] Guizhou Science,30(5):54—60(in Chinese). Xie T,Liu J,Liu JK,2006.A overview on the topological optimi— zation of structures J].Mechanical Engineer,(8):22—25 (in Chinese). Zhao DB,Fan J,Li GZ,2009.Topology optimization design of bi— 2)根据实心无梁楼盖的单元伪密度分布情况 可知,楼盖中间层单元伪密度值很小,可大量挖空; 上、下层单元伪密度值较大,应全部或部分保留。 据此,提出了4类石膏空腔模无梁楼盖结构形式:密 肋式楼盖、空腹板架楼盖、井式楼盖、其他网格楼 盖。四类无梁楼盖的混凝土用量约是等截面高度 的传统无梁楼盖结构的25%~45%,自重大大 减轻。 cycle frame based on ANSYS[J].Journal of Engineering Design,16(5):391—394(in Chinese). Zhong YC,Huang Y,Chen B,2014.The structure and features of two--type gypsum embedded filler cast-・in-・place concrete hollow lfoor[J].Guizhou ̄iece,32(2):n22-26(in Chi- nese). [附中文参考文献] 博弈创作室,2005.ANSYS9.0经典产品高级分析技术与实例 [REFERENCES] Anon.(Edited by Boyi Studio),2005.Advanced analysis techn— 详解[M].北京:中国水利水电出版社:203—227. 陈敏志,张旭明,徐冯君,2005.拓扑优化研究方法综述[J]. 山西建筑,31(21):63—64. iques and detailed examples for classic ANSYS9.0[M]. Beijing:China Water Power Press,203-227(in chinese). 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(上接第1 6页) [REFERENCES] Anon.(Edited by National Pharmacopoeia Conmaittee).2010.The method for determination of berberine hydrochloride in Fuyankang Pills[J].Journal f oYunnan University(Natural Science Edition),31(S1):453—455(in Chinese). Chinese Pharmacopoeia[M],Beljing:China Medical Sci— enee and Technology Press.The appendix(in Chinese). Hu JQ,Hu X,2009.The moderu research on chemical composi— tion and pharmacological effects of Phellodendron amur— [附中文参考文献] 国家药典委员会.2010.中国药典[M].北京:中国医药科技 出版社,附录 ense Rupr[J].Journal ofModern Medicine,15(7):139— 141(in Chinese). Lu L.2010.Content determination of the berberine hydroehioride 胡俊青,胡晓,2009.黄柏化学成分和药理作用的现代研究 当代医学[J].15(7):139—141. 卢蕾,2010.HPLC法测定痔比舒胶囊中盐酸小檗碱的含量 [J]湖南中医药大学学报,30(6):44—45. 杨志晶,何昆云,方洪叶,张韩艺,2009.HPLC法测定妇炎康 in corter phellodendri chinensis of Zhibishu jiaonang by HPLC[J].Journal fTCM Uniov.ofHunan,30(6):44—45 (in Chinese). Yang ZJ,He KY,Fang HY Zhang HY,2009.To establish HPLC 片中盐酸小檗碱的含量[J].云南大学学报(自然科学 版),31(S1):453-455. 

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