大鼠抗双链DNA抗体(dsDNA)酶联免疫分析

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：大鼠抗双链DNA抗体(dsDNA)酶联免疫分析试剂盒使用目的：

本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中抗双链DNA抗体(dsDNA)含量。实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠抗双链DNA抗体(dsDNA)水平。用纯化的

制成固相抗原，往包被抗原的微孔中依次加入抗双链DNA大鼠双链DNA抗原包被微孔板，

抗体(dsDNA)，再与HRP标记的双链DNA抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗双链DNA抗体(dsDNA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠抗双链DNA抗体(dsDNA)浓度。

试剂盒组成123456

20倍浓缩洗涤液酶标试剂酶标包被板样品稀释液显色剂A液显色剂B液

30ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶

789101112

终止液

标准品（450ng/L）标准品稀释液说明书封板膜密封袋

6ml×1瓶0.5ml×1瓶1.5ml×1瓶1份2张 1个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤

1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标

准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二

再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

（稀释后各孔加样量都为50μl，品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。

。浓度分别为300ng/L，200ng/L，100ng/L，50ng/L，25ng/L）

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

然后再加待测样品10μl（样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，

。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混品最终稀释度为5倍）

匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止

液后15分钟以内进行。计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标

计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，

即为样品的实际浓度。注意事项

1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值

，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计大于标准品孔第一孔的OD值）

算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。检测范围：

15ng/L-400ng/L规格：

96人份/盒

保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月