特产研究 Special Wild Economic Animal and Plnta Research 15 文章编号:1001—4721(2013)02—0015—04 黄芩提取物抗炎活性试验研究 李红军 (吉林省永吉县口前镇农业技术推广站,吉林永吉132200) 摘要:采用水煎法从黄芩中提取有效成分,经浓缩后配制成不同浓度。采用鲜蛋清致大鼠足肿胀试验、醋酸腹腔注射致小鼠 腹腔毛细血管通透性升高试验、二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀试验,观察黄芩提取物的抗炎作用,地塞米松为阳性对照组、生理盐 水为空白对照组。结果,黄芩高、低剂量组对鲜蛋清致大鼠足肿胀、醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小 鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用,且剂量越高抑制作用越明显。 关键词:黄芩;提取;炎症;试验研究 中图分类号:R285.5 文献标识码:A Study on Anti—-inflammatory Activiites of Scutellaria Baicalensis Geor ̄Extracts U Hong—jan (Agricultural Technology Promotion Station of Kouqian Town,Yongji County,Yongji 132200,China) Abstract:Effective components were extracted from Saae//ar/a Ba/ca/ens/s Ge0rgi usiI】g frynSi water method,then hte extract惝concentrated to diferent concentrations.Operation of1iquidsAdopt harpooIl¥food glue ratsinduced byfoot swelling experiment,aceitc acidintrapeiftonealin- jcteion superthreshold increase of blood capillary permeability of het abdomin induced by xy1ene.The experimental resulst showed that auricle tumefaction mice anti—inflammatory effcte of extracts.Through the control group,that dexamethasone saline solution was positive resuls,raditx scutellariae high,low dose group ofdiagonalfork dishglue ratsinducedby aceitc acidinmicefoot swell,causedbytheincrease ofblood eapil— lary permeability of he abdominalt induced by dimethylbenzene in mice,hind paw edema has apparent inhibiiton,and the higher doses of he tnlore obvious inhiitihon. Key words:scutellaria baicalensis georgi;extraction;inflammation;test 黄芩为唇形科植物黄芩(Scutel/ar/a baicalensis 黄酮类化合物。其中的黄芩苷与黄芩素能抑制过敏 性炎症渗出、降低毛细血管通透性,有抗组织胺与抗 乙酰胆碱作用。 Geo嚼)的干燥根,最早记载于《神农本草经》中,主产 于黑龙江、吉林、辽宁、河北、河南、山东、四川、云南、 山西、陕西、甘肃、内蒙等地¨J。具有清热、泻火、解 毒、止血、安胎等作用。 为了进一步证实其抗炎作用,本试验采用鲜蛋 清致大鼠足肿胀试验、醋酸腹腔注射致小鼠腹腔毛 近几年来,国内、外学者对其化学成分做了大量 研究。黄芩主要含有黄酮类成分,此外还含挥发油、 苯乙醇糖苷、少量葡萄糖、谷甾醇、胡萝卜苷和微量 元素等。药理作用主要有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗 炎、抗变态反应、抗肿瘤等 J。黄芩主要有效成分为 收稿日期:2013~03—08 细血管通透性升高试验、二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀 试验,观察黄芩提取物的抗炎作用,为黄芩抗炎作用 的开发研究提供依据 3。 1材料、仪器及试剂 1.1材料 作者简介:李红军(1968一),男,汉族,吉林省吉林人,本科,农艺师,从事农业技术推广工作。 16 特 产 黄芩饮片(吉林市站前北联大药房)。 1.2仪器 722一可见分光光度计(上海光谱仪器有限公 司);JA1203电子天平(上海精密仪器有限公司);高 速万能粉碎机、sHB—D真空泵(郑州长城仪器厂); 电热鼓风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);电 磁炉(中山市乐庭电器有限公司);RE252A型旋转蒸 发仪(上海亚荣生化仪器厂)。 1.3试剂 0.5%伊文氏蓝溶液、0.6%冰醋酸、生理盐水、 二甲苯、阳性对照药地塞米松、生理盐水、鲜蛋清、 40%NaOH、85%乙醇、浓HC1,以上药品均为分析纯, 由吉林农业科技学院生物技术实验室提供。 1.4试验动物 K_M小鼠(普通级)4o只,体重18~24g;Wistar大 鼠80只,体重130—150g,雌、雄各半,均购于正业生 物制品有限公司。 2试验方法 2.1 黄芩中黄酮类物质的提取 称取600g黄芩饮片,烘干,分2份放入500g高 速万能粉碎机中粉碎,过40目筛,密封保存。精确 称取300g黄芩粉,加12倍量水,煮沸2h;再加10倍 量水,煮沸1.5h。4层纱布过滤,合并滤液800mL, 浓缩至400mL,加浓HCt调pH至l~2,80℃水浴,恒 温30min,沉淀I4],加200mL蒸馏水,加40%NaOH调 pH至7,加95%乙醇200mL,80oC水浴溶解,加浓 HC1调pH至1 2,60cI=水浴30min,300mL蒸馏水洗 涤2次,用85%200mL的乙醇洗涤2次,抽滤,得黄 芩提取物【5l。 2.2黄芩提取物抗鲜蛋清致大鼠足肿胀试验 取大鼠40只,雌、雄各半,随机分为4组,每组10 只,分为阳性对照地塞米松组,空白对照生理盐水组, 黄芩提取物高O.250g/mL、低0.150g/mL 2个剂量组。 测试组每天灌胃给药1次,给药量20m ̄kg,连续5d。 对照组每天灌胃等量生理盐水。末次给药同时阳性 对照组腹腔注射地塞米松,空白对照组腹腔注射等 剂量生理盐水。末次给药后1h,先按容积测定方法 测量各鼠右踝关节以下容积,然后从左后足掌心向 研 究 2013年第2期 踝关节方向皮下注射鲜蛋清0.1mL致炎。注射致 炎物后60min、120min、180min、240min分别测量足容 积[6l。 2.3黄芩提取物抗醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透 性升高试验 取小鼠40只,雌、雄各半,随机分为4组,每组10 只,分为阳性对照地塞米松组,空白对照生理盐水组, 黄芩提取物高0.ZSO#mL、低0.150g/mL 2个剂量组。 测试组每天灌胃给药1次,给药量20m ̄kg,连续5d。 对照组每天灌胃等量生理盐水。末次给药同时阳性 对照组腹腔注射地塞米松,空白对照组腹腔注射等 剂量生理盐水。末次给药后60min,测试组及空白 组每鼠经尾静脉注射0.5%伊文斯蓝0.1mL/10g,同 时腹腔注射0.6%冰醋酸0.2mL/只。15min后,脱颈 椎处死小鼠,剪开腹腔,用6mL生理盐水分数次洗 涤腹腔,吸出洗涤液,加人生理盐水至10mL, 3 O00r/min离心10min,取上清液,于590nm波长处比 色,测定OD值【 。 2.4黄芩提取物抗二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验 取小鼠40只,雌、雄各半,随机分为4组,每组10 只,分别为阳性对照地塞米松组,空白对照生理盐水 组,黄芩提取物高0.250g/mL、低0.150g/mL 2个剂量 组。测试组每天灌胃给药1次,给药量20m ̄kg,连续 5d。对照组每天灌胃等量生理盐水。末次给药后 60mirl测试组及空白组每只小鼠以0.02mL二甲苯滴 于右耳致炎。15rain后阳性对照组腹腔注射地塞米松 溶液,空白对照组腹腔注射等剂量生理盐水。60n1in 后将小鼠颈椎脱臼处死,沿耳廓基线剪下二耳。用 6mm直径打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳 片,称重,以左、右耳重量差作为肿胀度。 2.5计算方法 足趾肿胀率:查卮星暑善 x 100% 肿胀抑制率=鳗性 巽 嘉荔 x 100% 渗出抑制百分率=窒鱼塑 ×-0o% 鼠耳肿胀率=查里 ×10o% 2.6数据处理 小鼠后肢足趾肿胀试验、小鼠毛细血管通透性增 第2期 李红军:黄芩提取物抗炎活性试验研究 17 高试验及小鼠耳肿胀试验中肿胀率、渗出率均以平均 3结果分析 值±标准差(王-I-sD)表示,t检验分析差异显著性。 3.1 黄芩提取物对鲜蛋清致大鼠足肿胀的影响(表1) 表1 黄芩提取物对鲜蛋清致大鼠足肿胀的影响( -I-SD) T{出Ie 1 Effects of Scutellaria baicalensis georgi extract induced rats’food swelling ol3 fresh egg 注:与空白对照组比较,*P<0.05,**P<0.01;n=10。下表同。 №:(h呷哪ed withthe blank contml group P<0.05,**P<O.01;n=10.The asinthefollowingtable 由表1可知,黄芩提取物试验组与生理盐水空 0.O05g/mL时差异极显著(P<0.01),肿胀抑制率为 白对照组大鼠足趾肿胀率比较,黄芩提取物浓度在 34.20%。黄芩提取物有一定的抗炎作用。 0.]50g/mL以上时差异显著(P<0.o5);地塞米松对 3.3黄芩提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 照组与生理盐水空白对照组小鼠足趾肿胀率比较, 地塞米松浓度为0.005g/mL时差异极显著(P< 表3黄芩提取物对-Ep苯致小鼠耳廓肿胀的影响( -I-SD) 0.01)。黄芩提取物有一定的抗炎作用。 Table 3 Effects of Scutellaria baicalensis georgi extract 3.2黄芩提取物对醋酸致小鼠毛细血管通透性增 高的影响(表2) 表2黄芩提取物对腹腔毛细血管通透性的影响( ±SD) Table 2 Effects of Scutellaria 10 ̄icalensis georgi extract on peritoneal blood capillary peITneabiIity 由表3可知,黄芩提取物试验组与生理盐水空 白对照组鼠耳肿胀率比较,黄芩提取物浓度在 0.250g/mL时差异极显著(P<0.01),肿胀抑制率在 37.02%;地塞米松对照组与生理盐水空白对照组鼠 由表2可知,黄芩提取物试验组与生理盐水空 耳肿胀率比较,地塞米松浓度为0.005g/mL时差异 白对照组鼠伊文思蓝渗出率比较,黄芩提取物浓度 极显著(P<0.O1),肿胀抑制率为52.63%。黄芩提 在0.250g/mL时差异极显著(P<0.O1),肿胀抑制 取物有一定的抗炎作用。 率在29.09%;地塞米松对照组与生理盐水空白对 4结论 照组鼠伊文思蓝渗出率比较,地塞米松浓度为 黄芩提取物试验组与生理盐水空白对照组小鼠 18 特 产 研 究 2013年第2期 足趾肿胀率比较,黄芩提取物浓度在0.150s/mL以 定的抗炎作用,且作用强度与剂量呈一定的依赖性。 上时差异显著(P<O.05);地塞米松对照组与生理 本试验为进一步开发利用中草药黄芩提供了依据。 盐水空白对照组小鼠足趾肿胀率比较,地塞米松浓 度为0.005g/mL时差异极显著(P<0.01)。 参考文献 黄芩提取物试验组与生理盐水空白对照组鼠伊 [1]李欣,魏朔南.黄芩的生物学研究进展[J].中国野生植物 文思蓝渗出率比较,黄芩提取物浓度在0.250g/mL 资源,2006,(12):11—16. 时差异极显著(尸<0.01),肿胀抑制率为29.09%; [2]张喜平,李宗芳,刘效恭,等.黄芩素的药理学研究概况 地塞米松对照组与生理盐水空白对照组鼠伊文思蓝 [J].中国药理学通报,2001,(6):711—713. 渗出率比较,地塞米松浓度为0.005;g/mE时差异极 [3]陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社, 2000. 显著(P<0.01),肿胀抑制率为34.20%。 [4]黎万寿,陈幸.黄芩苷提取工艺研究[J].中草药,2OOO, 黄芩提取物试验组与生理盐水空白对照组鼠耳 (2):107—108. 肿胀率比较,黄芩提取物在浓度0.250g/mL时差异 [5]冯青然,王元瑜,马振山,等.中药水煎煮液分离纯化工艺 极显著(P<0.01),肿胀抑制率为37.02%;地塞米 的比较研究[J].中国中药杂志,2OO2,(1):28—30. 松对照组与生理盐水空白对照组鼠耳肿胀率比较, [6]刘金霞,邓淑华,杨贺松,等.黄芩茎叶总黄酮的抗炎作用 地塞米松浓度为0.005;g/mL时差异极显著(P< 机制的研究[J].中国药理学通报,2OO2,(6):713—714. 0.01),肿胀抑制率为52.63%。‘ [7]李建国,王新杰,张学东,等.黄芩茎叶总黄酮对小鼠急性 黄芩提取物的各个剂量组都有明显的抑制炎症 腹膜炎模型的预防治疗作用[J].中国中药杂志,2004, 反应的作用,与体外抗菌作用相符。测试组与生理 (9):923—924. 盐水组比较,方差试验充分验证了黄芩提取物有一 (上接第2页)横向拖尾。2D—cleanup纯化法为最 参考文献 优的鹿茸组织蛋白双向电泳提取方法。 [1]蒋兰兰.大鼠成骨细胞分泌组双向电泳样品制备方法的 3讨论 建立[J].南京医科大学学报,2O07,27(7):770—772. 样品制备为双向电泳中最为关键的一步,获得高 [2]赵东.梅花鹿鹿茸总蛋白提取方法对双向电泳图谱的影 质量的蛋白提取液对后续的蛋白质双向电泳分离至 响[J].中国畜牧兽医,2012,39(7):25—28. 关重要。梅花鹿鹿茸组织由软骨组织和骨组织组成, [3]姚宏亮.胃癌和胃正常黏膜组织差异蛋白质组学和免疫 成分复杂,含有很多脂类、糖类、无机盐、核酸等物 组化研究[D].广州:中山大学,2009. 质}4],严重影响蛋白质水化和等点聚焦程序;组织中 [4]Pathak NN,Pattanaik AK,Patra RC,et a1.Mineral composition 含有大量血液白蛋白等高丰度蛋白质严重影响了低 of antlers ofthree deer speciesIe鲫edin c印 【JJ.SmallRu— minant Res,2001,42(1):61—65. 丰度蛋白质的分布。双向电泳试验中常用的除杂方 [5]赖童飞,董薇,贾银华,等.棉花胚珠蛋白三氯乙酸丙酮法 法有超高速离心、TCA一丙酮沉淀法、透析等。TCA一 与酚抽提法的比较分析[J].农业生物技术学报,2009,17 丙酮沉淀法能够有效地降低蛋白质样品中的盐、糖 (2):317—322. 类、脂类、核酸等杂质对试验的干扰【5,6J,对去除白蛋 [6]张彬,谭岩.大鼠血清的4种处理方法对2一DE效果的影 白也有明显的效果【7,8J,但是由于蛋白质沉淀很难完 响[J].中国实验诊断学,0212,16(9):1544—1547. 全复溶,损失较为严重;超高速离心、透析的除杂效果 [7]Chen YY,Lin SY,Yeh YY,et a1.A modiifed protein precipita— 较好但是并不能降低白蛋白等高丰度蛋白质的影响。 tion procedure for eficient l ̄moval of albumin from s ̄m[J]. 经过研究,Bio—Rad 2D—cleanup蛋白纯化试剂盒对 Electrophoresis,2005,26:2117—2127. 梅花鹿鹿茸组织蛋白质提取过程中杂质的去除、降低 [8]孙太欣.双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较 白蛋白等高丰度蛋白质的影响具有较好的效果。 [J].中国医药生物技术,2007,2(3):172—175.