第8期(总第289期) 2012年8月 农产品加工・学刊 Academic Periodical of Farm Products Processing No.8 Aug. 文章编号:1671—9646(2012)08—0055—03 酶法提取枸杞多糖及脱色方法研究 邹东恢,李国全 (齐齐哈尔大学食品学院农产品加工重点实验室,黑龙江齐齐哈尔161006) 摘要:研究了酶法提取枸杞多糖及脱色工艺方法。采用纤维素酶、木瓜蛋白酶复合处理提取枸杞多糖,采用正交试 验确定最佳脱色工艺条件为:活性炭用量2%,脱色温度30℃,酶解液pH值5,脱色时间1.5 h。 关键词:枸杞多糖;酶法提取;脱色 中图分类号:TS255 文献标志码:A cloi:10.3969/jissn.1671—9646(X).2012.08.014 Research on Lyc ium BITI'b ol'izm Polysaccharides by Enzyme Extraction and Decolouration ZOU Dong-hui,LI Guo-quan (Key Laboratory ofProcessing Agricultural Products,College ofFood Science,Qiqihar University, Qiqihar,Heilongjiang 161006,China) Abstract:The paper discusses the optimum conditions of he tLycium barbarum polysaceharides enzymatic extraction and decol— oration.Using papain and cellulose enzyme complex processing,the best decoloration technology conditions are determined by orthogonal experiments as follows:quantity of activated carbon 2.O%,temperature 30 oC,pH value 5.0,adsorption time 1.5 h. Key words:Lycium barbarum polysaeeharides;enzymatic extraction;deeolouration 量,放人粉碎机中粉碎,将粉碎后的枸杞粉依次通 过40,6O,80,100目筛,然后把各级枸杞粉分别 枸杞为茄科(Solanaceae)植物枸杞Lycium 装到清洁干燥的烧杯中,置于真空干燥箱中待用。 chinense Mill的成熟果实,是我国传统的滋补中药 苯酚,天津市科密欧化学试剂开发中心提供; 0引言 材。《本草纲目》中记载枸杞具有坚筋骨、补精气 诸不足、明目安神、令人长寿等功效f11。目前人们对 枸杞多糖进行了较广泛的研究,发现枸杞多糖具有 增强机体免疫力、抗肿瘤、抗衰老、降血脂、降血 糖、抗疲劳、护肝、防辐射、抗缺氧等功效l 2l,且无 任何毒副作用。 枸杞多糖附着的色素在色泽上不易被人们所接 受,制药生产中多用活性炭对其进行处理。本文采 用酶法提取枸杞多糖,并以脱色率和多糖损失率为 指标,对活性炭脱色工艺条件进行研究,以得出最 佳脱色工艺参数。 葡萄糖,天津市凯通化学试剂有限公司提供;活性 炭(粉状),沈阳市东兴试剂厂产品;硅藻土:西安 化学试剂厂产品;Sephadex G一75,Pharmacia公司提 供;纤维素酶,国药集团化学试剂有限公司提供; 木瓜蛋白酶,北京世纪时尚科贸有限公司提供;使 用试剂均为分析纯。 1.2试验仪器与设备 电子天平、722型紫外分光光度计、PB一1O型 pH计,北京赛多利斯仪器系统有限公司提供;真空 干燥箱,上海益恒试验仪器有限公司提供;电热恒 温水浴锅、THz一82A型台式恒温振荡器、离心机, 上海跃进医疗器械厂产品;九阳料理机,山东九阳 1材料与方法 小家电有限公司提供;H卜2s型恒流泵,上海青浦 1.1试验材料与试剂 沪仪器厂产品;Spectumone傅里叶变换红外光谱仪, 将新鲜枸杞用清水洗净,去除泥沙等杂质,挤 美国PE公司提供。 压后适当切块,放入真空干燥箱干燥,待枸杞恒质 收稿日期:2012—03—29 作者简介:邹东恢(1967一),男,黑龙江人,副教授,硕士,研究方向:生物工程及农产品深加工技术。 E-mail:zoudongh99@sina.corn。 农产品加工・学刊 2012年第8期 1-3酶法提取构杞多糖 分别为0.1%,O.2%,0.3%,O.4%,O.5%,O.6%,在 称取干燥的8O目粒度枸杞粉5 g,放人到250 mL 温度50℃水浴中浸提1 h,测定多糖提取率。 的三角瓶中,加蒸馏水70 mL,混合均匀后置于5O℃ 酶质量分数对多糖提取的影响见图2。 水浴锅中,水浴30 min,调节pH值;称取木瓜蛋白 :: 酶和纤维素酶按一定比例混合,加入10 mL蒸馏水 10 溶解,枸杞溶液放在水浴中预热至酶解温度,将酶 离8 液加入到枸杞溶液中,在恒温振荡器上提取,反应 鬟: 结束,将三角瓶放到沸水锅中,10 min沸水浴灭酶, 2 灭酶结束,冷却至室温,将酶提取液放入到离心管 O 中,4 500 r/min离心,取上清液,即得到酶提取多 酶质量分数 糖液。 1.4葡萄糖标准曲线绘制与多糖含量测定 用苯酚一硫酸比色法测定多糖含量l 3_,得葡萄糖 标准曲线的回归方程为: Y=0.552 8X+0.01 1 4.R =0.996 1. 1.5多糖的分离提取及脱色率测定 酶解之后取清液,透析后去除杂蛋白,活性炭 (2%)脱色1 h,加入体积分数95%的乙醇,使溶液 中乙醇的体积分数达到75%,进行醇沉,醇沉过程中 要将其保存在4℃冰箱中,保持24 h,4 500 r/min离 心15 min,取沉淀,置于真空干燥箱中干燥,即可 得到枸杞粗多糖。 脱色率的测定采用紫外分光吸收法 。 2结果与分析 2.1单因素试验 2.1.1物料筛分粒度 将粉碎后的枸杞粉依次通过40,60,80,100 目筛,取一定量样品,选择液料比20,温度5O℃水 浴中浸提1 h,枸杞多糖提取率分别为3.7%,3.9%, 4.3%,4.3%,4.2%。 液料比对枸杞多糖提取率的影响见图1。 液料比l/mL:g 图1 液料比对枸杞多糖提取率的影响 由图1可知,筛分粒度80~100目的物料多糖提 取率最高,因此试验确定物料筛分粒度80~100目。 2.1.2酶质量分数 称取80目的枸杞粉5 g,选择液料比20:1,加 入适量酶(纤维素酶与木瓜蛋白酶质量比为1:1), 控制酶质量分数(酶质量占枸杞粉质量的百分比) 图2 酶质量分数对多糖提取的影响 从图2可以看出,随着酶质量分数的增加,多 糖提取率也逐渐增加,酶质量分数大于0.4%后提取 增加率趋于平缓。考虑酶的成本及提高效果,宜将 酶质量分数确定为0.4%。 2.2枸杞多糖脱色正交试验 在脱色时间(1.5 h)不变的条件下,对活性炭 用量、脱色温度、pH值3个因素进行正交试验,每 个因素选3个水平,分别以脱色率和多糖损失率为 考察指标,选用正交表 (34)进行试验。 脱色试验因素与水平设计见表1,枸杞多糖脱色 正交试验结果与分析见表2。 表1 脱色试验因素与水平设计 表2枸杞多糖脱色正交试验结果与分析