维普资讯 http://www.cqvip.com ＩＳＳＮ１００７—８７３８细胞与分子免疫学杂志（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ ｌｍｍｕｎｏ１）２００８，２４（２ ・１５９ 论著・ 文章编号：１００７—８７３８（２００８）０２—０１５９—０３ 类风湿性关节炎ＲＦ阳性与阴性患者外周血ＣＩＭ＋细胞基因表达的差异 吕 诚 ，徐世杰 ，肖 诚 ，阎小萍 ，赵林华 ，王建明 ，李梢 ，吕爱平¨ （中国中医科学院： 中医临床基础医学研究所， 中医基础理论研究所，北京１００７００； 中日友好医院，北京１０００２９； 清华大学 生物信息研究所，北京１０００８４； 上海高校中医内科Ｅ研究院，上海２０１２０３） Ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒ－ ｆ类风湿性关节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）是以 ａｌ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ＲＦ ａｎｄ ＲＦ—ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＬＵ Ｃｈｅｎｇ ，ＸＵ Ｓｈｉ－ｉｆｅ ，ＸＩＡＯ Ｃｈｅｎｇ ，ＹＡＮ Ｘｉａｏ． ｐｉｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｌｉｎ．ｈｕａ ，ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ．ｍｉｎｇ ，ＬＩ Ｓｈａｏ ， ＬＵＡｉ－ｐｉｎｇ ・ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎ Ｃｈｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００７００， Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ＡＩＭ：Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＲＦ ａｎｄ ＲＦ— ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ｍＲＮＡ ｏｆ ａｌＩ ｔｈｅ ＣＤ４ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉ－ ｌｆｅｄ、Ｔｈｅｎ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｌａｂｅｌｅｄ ａｎｄ ｈｙｂｒｉｄｉｚｅｄ ｔｏ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓ． ＲＥＳＵＬＴＳ：Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ５５ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＲＦ ａｎｄ ＲＦ—ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ： Ｔｈｅｒｅ ａｒｅ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＲＦ ａｎｄ ＲＦ—ｐａｔｉｅｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｓｅ ｇｅｎｅｓ ａｒｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｉｍｍｕｎｏｒｅ－ ｓｐｏｎｓｅ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ；ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ；ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ［摘要］ 目的：研究ＲＦ因子阳性及阴性ＲＡ患者之间是否 存在基因组学的差异，探询差异存在的基因表达基础。方法： 应用基因表达谱方法来检测上述两型患者ＣＤ４ 淋巴细胞基 因表达情况。结果：ＲＦ因子阳性与阴性患者之间有５５条基 因表达差异有统计学意义。结论：ＲＦ因子阳性与阴性ＲＡ患 者之间存在差异表达基因，这些差异基因多与免疫应答相关。 ［关键词］类风湿性关节炎；类风湿因子；基因表达 ［中图分类号］Ｒ５９３．２２ ［文献标识码］Ａ 收稿日期：２００７—０３—１２；接受日期：２００７—０４—０９ 基金项目：国家自然科学基金重点资助项目（９０２０９Ｏ０２）；上海高校中医 内科Ｅ研究院资助项目（Ｅ０３００８）；科技部国际合作项目 （２ｏｏ６ＤＦＡ３１７３０） 作者简介：吕诚（１９７９一），男，江西都昌人，助理研究员，硕士 Ｔｅｌ：０１０—６４０６７６１ｌ；Ｅ—ｍａｉｌ：Ｉｖ—ｃｈｅｎｇ０８１６＠１６３．ｃｏｒｎ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕ￣ｏｒ．Ｅ—ｍａｉｌ：１ａｐ６４０６７６１ ｌ＠１２６．ｃｏｒｎ 周围关节对称性炎症为主、伴反复发作的慢性全身 性疾病，患者中关节局部致残率高达６０％以上，是 一种严重危害人类健康的自身免疫性疾病，其病因 目前尚不十分明确，主要与遗传、感染、激素、免疫 因素等相关…。近期研究表明：ＲＡ的发生发展与 ＣＩＭ淋巴细胞改变关系密切，关节滑膜中浸润的 ＣＩＭ Ｔ淋巴细胞对自身抗原产生特异性免疫应答， 促进单核巨噬细胞的活化核细胞毒性Ｔ细胞的分化， 导致炎症细胞因子释放，形成炎性损伤。类风湿因 子（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ｆａｃｔｏｒ，ＲＦ）是临床诊断和治疗ＲＡ过 程中最常用的检测项目之一，它在ＲＡ中的阳性率约 为６０％～８０％，但特异性低 ’ 。为了探询ＲＡ中 ＲＦ阴性与阳性患者之间是否存在基因表达差异，我 们利用基因芯片技术对ＲＡ患者外周血ＣＩＭ 细胞进 行了检测与研究。 １对象和方法 １．１对象ＲＡ患者３３例来自北京中日友好医院风湿病科 及中国中医科学院西苑医院风湿病科，均为女性患者，年龄 ２１～６０岁，平均（４２．８－－Ｉ９．９）岁，病程２～１０年，平均（３．８－Ｉ－ ４．９）年；其中ＲＦ 患者２２例，年龄２１～６０岁，平均（４１．６ ４－ １０．９）岁，病程２～１０年，平均（５．０５ ４－１．８１）年；ＲＦ一患者１１ 例，年龄３４～６０岁，平均（４５．１±７．４）岁，病程２～８年，平 均（４．９１ ４－１．４５）年。疾病诊断参照１９８７年美国风湿病学会 （ＡＲＡ）修订的诊断标准 ，病例排除标准包括：合并严重关 节外表现，如高热不退、多发类风湿结节、肺间质纤维化、肾 脏淀粉样变、缩窄性心包炎、血管炎等需要使用糖皮质激素 的患者；虽为本病患者，但长期服用有关治疗ＲＡ的慢作用 药物，且在本研究前至少１周内未停用甲氨喋呤、氯喹、柳氮 磺胺吡啶、环磷酰胺、青霉胺和金制剂等免疫抑制类药物的 患者；合并有循环、呼吸、消化、泌尿生殖、造血系统以及中 枢神经系统等严重疾病的患者；精神病患者；孕妇或哺乳期 女性的患者；过往用药记录不明确者。另选中国中医科学院 西苑医院体检中心１２名体检者作为对照，对照组为正常体检 人群，经体检后其心电图、血脂、血糖及肝功能均无异常。 维普资讯 http://www.cqvip.com ｌ６０ ＩＳＳＮ１００７—８７３８细胞与分子免疫学杂志（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏ１）２００８，２４（２ 所有纳入者均采集晨起空腹静脉血６～８ ｍＬ，肝素抗凝备用。 １．２方法 １．２．５数据的分析包括图像的分析、标准化处理、ｒａｔｉｏ值 分析、基因的聚类分析。利用ｇｅｎｅｐｉｘ ４１００分析软件，对扫描 １．２．１ ＣＤ４ Ｔ淋巴细胞分离纯化采集的静脉血，以体积 的图像进行图像－数据的转换。所得数据，根据芯片数据剔除 的基本法则，剔除一些不可靠基因点值，包括剔除荧光值溢 出点，荧光前景值低于１．５倍背景中位数值的基因点，然后 比为５０ Ｌ／１ ｍＬ血液的比例，将ＣＤ４ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ抗体加入 血液中混匀，室温下放置２０ ｍｉｎ。含胎牛血清的ＰＢＳ等量稀 释样本，轻轻混匀，将混合液体小心加到Ｆｉｅｏｌｌ密度介质上， 形成分界面，室温下１ ２００ ｇ速度离心２０ ｍｉｎ。用一次性吸量 根据转换数据中的ＳＮＲ（信噪比），剔除ＳＮＲ＜２的位点。剔 除不可靠点后，剩余荧光点做散点图，Ｃｙ５与Ｃｙ３的值分布呈 现线性回归关系，对荧光值中位数Ｃｙ５／Ｃｙ３比值取对数处理， 使之呈正态分布。在此数据的基础上，以 为０，各芯片ｓ均 值为ｓ，对Ｃｙ５／Ｃｙ３值作归一化处理。所得数据进行统计学分 管在密度介质层与血浆层之间收集淋巴细胞，ＰＢＳ清洗，冰 氯化铵溶解残存红细胞，ＰＢＳ清洗２遍，即可得到纯度９０％ 以上的ＣＤ４ Ｔ淋巴细胞。 １．２．２ ＲＮＡ提取及鉴定按ＴＲＩｚｏｌ说明书，提取细胞总 析，以Ｐ＜０．０５为显著性标准，同时限定正常与ＲＡ患者荧光 比值＞１．４或者＜１／１．４为差异表达的标准。所得结果借助 ＧｅｎｅＳｉｆｔｅｒ ｍｉｅｒｏａｒｒａｙ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｙｓｔｅｍ进行ｐａｔｈｗａｙ等相关 参数的分析。 ＲＮＡ，并进行ＲＮＡ鉴定，其Ａ２６ｏ／Ａ 比值必须不低于１．７。 ａＲＮＡ制备：根据ＭｅｓｓａｇｅＡｍｐ ａＲＮＡ试剂盒操作说明进行。 用Ｔ＇／Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）逆转录合成第１条ｅＤＮＡ链，以第１条ｅＤＮＡ 链为模板合成第２条ｅＤＮＡ链，ｅＤＮＡ链纯化，体外转录合成 ａＲＮＡ，ａＲＮＡ纯化，ａＲＮＡ鉴定及含量测定。 １．２．３标记的ａＲＮＡ探针与基因表达芯片杂交及检测 芯片 ２结果 ２．１ ＲＦ 与ＲＦ一患者基因表达差异ＲＦ 与ＲＦ一患者之间 有５５条基因表达差异具有明显性（部分差异表达基因见表 １），其中上调基因有４０条，下调基因有１５条，这些差异表达 由Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ、Ｃａｎａｄａ提供，为全基因组序 列，共２３ ２３２个点，设有空白对照、阴性对照、管家基因对 照。根据ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｍｉｅｒｏｍａｘ ＡＳＡＰ ＲＮＡ ｌａｂｅｌｉｎｇ试剂盒操 作说明进行。所有芯片均以相同对照标记为Ｃｙ３，样本标记 为Ｃｙ５。 基因主要涉及免疫应答基因，如ＴＮＦ．受体超家族基因、热休 克蛋白基因、天冬氨酰－ｔＲＮＡ合成酶、干扰素 Ｔ细胞受体 １．２．４基因芯片图像扫描像扫描。 用ＧｅｎｅＰｉｘ４０００Ｂ ｓｃａｎｎｅｒ进行图 介导分子、ＳＴＡＴ诱导的ＳＴＡＴ抑制因子、干扰素 诱生蛋 白等。 表１ ＲＦ 与ＲＦ一患者部分差异表达基因 Ｔａｂ １ Ｄｅｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＲＦ ａｎｄ ＲＦ—ｐａｔｉｅｎｔｓ ２．２ Ｒ１Ｆ 、Ｒ１Ｆ一患者与对照组的表达差异ＲＦ 、ＲＦ一患者 稳定蛋白、锌指蛋白２６４、信号识别蛋白、蛋白激酶ＮＹＤ－ 与对照组之间有４２条基因差异表达（部分差异表达基因见表 ２），这些差异表达基因主要与成纤维细胞生长因子８、钙调热 ＳＰ１５等相关。 维普资讯 http://www.cqvip.com ＩＳＳＮ１００７—８７３８细胞与分子免疫学杂志（Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏ１）２００８，２４（２ １６１ 表２ ＲＦ 、ＲＦ一患者与对照组之间部分差异表达基因 Ｔａｂ ２ Ｄｅｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｇｅｎｅｓ ａｍｏｎｇ ｇｒｏｕｐ Ｇｅｎｅ ｎａｍｅ Ｇｅｎｅ ＩＤ ＲＦ ／ｃｔｒｌ ＲＦ一／ｃｔｒｌ Ｔｍｎｓｃｏｂａｌ…１（ｖｉｔａｍｉｎ ＢＩ２ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｒ ｂｉｎｄｅｒ ｆａｍｉｌｙ）ＮＭ￣１０６２ Ｉ－ａｍｉｎ￣ｙｅｌｏｐｍｐａｎｅ－卜ｃａｒｉ￣ｘｙｆａｔｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ＮＭ＿ｏ３２５９２ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｄｉｆｆｅｍｎｔｉａｔｉｏｎ ｅｎｈ￣ｃｆａｇ ｆａｃｔｏｒ ｌ ＡＢＯ３３￣５ Ｆｉｂｍｂｌａｓｔ ｇｒａｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ８（￣ｄｒｏｇｅｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ） ＮＭ ０３３Ｉ６３ Ｃａｌｃｉｕｍ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｈｅａｔ－ｓｔａｂｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ（Ｍｒ２４０００） ＮＭ＿ｏ１４３１６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋＩｒＩａｓｅ￣ｃｈｏｒｉｎｇ ｐｍｔｅｉｎ ＧＫＡＰ４２ ＮＭ０２５２１ ｌ Ｉｎｔｅｒｅｌｍｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐ￣ｅｉｎ ｗｉｔｈ ｔｅｔｍｔｒｉ￣ｐｅｐｔｉｄｅ ｒｅｐｅａｔｓ ｌ ＮＭ００１￣８ ＫａＤ＇ｏｐｈｅｒｉｎ（ｉｍｐｏｒｄｎ）ｂｅｔａ ２ ＮＭ＿００２２７０ １ …一ｅｒｌａｔｅｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｐｍｔｅｉｎ ４—２ ＮＭ０２２￣７ Ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ２６４ ＮＭ Ｏ０￣Ｉ７ Ｐｒｏｔ￣ｅ（ｐ—ｎｅ，…ｐ ｎ）２６Ｓ ｓｕｂｕｎｉｔ，ｍｎ＿ＡＴＰａｓｅ．８ ＮＭ＿００２８Ｉ２ ＰｌＤ ｎｍｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ５ ＮＭ００４７￣ Ｓ‘ ｌａｌ￣ｏｇｎｉｄｏｎ ｐａｍｅｌｅ Ｍｒｌ９０【ｘ１ ＮＭ００３Ｉ３５ Ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏｅｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ，ｃｌａｓｓ Ｉ．Ｅ ＮＭ＿００５５１６ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｋ ＮＹＤ ＳＰＩ５ ＮＭ＿Ｄ３０９１ｌ Ｖ￣ｉｅｌｅ ａｍｉｎｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔ ｐｒｏｔｅｉｎ Ｉ ＢＣ０１５０４１ Ｕｂｉｑｕｉｎｏｌ—ｃｙｔ￣ｈｒｏｍｅ ｃ ｒｅｄｕｃｔ￣ｅ￣ｐｌｅｘ（Ｍｒ７ ２ＯＯ） ＮＭ＿ｏ１３３８７ ３讨论 ＲＡ是以对称性多关节炎为主要临床表现的系统 性自身免疫紊乱疾病，病程呈慢性、进行性、破坏性 进展。其发病机制目前尚不明确，众多研究表明ＲＡ 的发生发展涉及多种基因的异常变化，研究ＲＡ相关 的基因和蛋白变化，对于疾病的诊断、分类、治疗都 具有重要的意义。既往文献研究表明：ＣＤ４ Ｔ淋巴 细胞是自身免疫中的重要反应细胞，在ＲＡ发病中有 重要作用 ’ ，ＲＡ患者Ｔ细胞亚群中ＣＤ４ Ｔ淋巴细 胞比例及克隆扩增能力均有所改变 ’ 。因此选取 ＲＡ患者外周血ＣＤ４ Ｔ淋巴细胞作为研究的对象进 行观察。基因芯片技术经过１Ｏ余年的发展已１３益成 熟，它能够高通量、高效率、低能耗的对生物学信息 进行分析处理，它能够在１次实验中筛选出疾病的大 量相关基因群，检出疾病发生发展的决定基因。基 于如此优点的考虑，我们引入基因芯片技术对ＲＡ的 发病机制从基因水平进行研究和探讨。 ＲＦ异常变化是ＲＡ免疫功能异常的重要表现， 也是诊断和估计ＲＡ愈后的常用参考指标。通常所 说的ＲＦ是指采用乳胶凝集试验测得的ＩｇＭ—ＲＦ，但其 在ＲＡ患者阳性率为６０％～８０％，特异性较差 ’ｍ 。 在芯片检测中发现ＲＦ 与ＲＦ一患者之间有５５条基因 表达具有显著性差异，提示ＲＦ 与ＲＦ一患者之间确 实存在基因组水平的差异表达。这些差异的基因涉 及核苷酸糖、氨基糖、天冬氨酸等物质的代谢途径， 以及细胞因子受体、信号传导等多种生物学途径。 对这些基因的功能检索发现它们参与了细胞生长、 生理过程、分子结合、催化信号转导等过程。而由表 ２发现：与对照组健康人比较表达基因主要涉及有机 酸代谢、酶类活性、生长过程调节、细胞增殖抑 制、跨膜离子转运以及部分特定酶活性调节等。将 表１与表２中差异基因进行比对，发现只有４个差异 基因表达是相同的，这个结果反映了ＲＡ患者同正常 对照之间及ＲＡ患者不同ＲＦ型之间的基因差异表 达，存在各自的基因表达谱基础。 利用基因芯片技术和生物信息学技术分析基因 在全局、系统水平的机制是当前功能基因组学 的重要研究手段，它明显优于过去的单一基因研究 模式，可以在整体基因组的水平对基因的表达 网络机制，进行系统全面的分析 。临床的ＲＡ患 者中表现为不同ＲＦ型很常见，但是相关的基础研究 却不多见。此次的实验结果从基因组学的角度反映 出不同ＲＦ型ＲＡ患者之间存在基因表达谱的差异， 而差异基因主要与免疫应答过程相关，今后可以围 绕具体的差异表达基因进行分析，找出两型患者的 特征基因，从而提高ＲＦ对ＲＡ临床诊断的特异性， 具有一定的临床意义。 参考文献： ［１］姜良勇．类风湿性关节炎发病的免疫学机制［Ｊ］．细胞与分子免 疫学杂志，１９９８，１４（３）：２３３—２３５． ［２］吴庆军，曾小峰，唐福林，等．类风湿关节炎早期诊断的血清学 研究和ｌ临床应用［Ｊ］．医学研究杂志，２００６，３５（５）：４３—４４． ［３］卿之驹，秦立新，蒋洪敏．检测类风湿因子ＩｇＭ—ＲＦ、ＩｇＧ—ＲＦ、ＩｇＡ． ＲＦ在类风湿关节炎中的ｌ临床意义［Ｊ］．中国现代医学杂志， ２００４，１４（１４）：ｌｌ７一ｌｌ９． ［４］Ａｍｅｔｔ ＦＣ，Ｅｄｗｏｒｔｈｙ ＳＭ，Ｂｌｏｃｈ ＤＡ，ｅｔ ａ１．Ａｍｅｒｉｃａｎ ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ １９８７ ｒｅｖｉｓｅｄ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｌｓａｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒ Ｒｈｅｕｔｎ，１９８８，３１（３）：３１５—３２４． ［５］Ｗａｇｎｅｒ Ｕ，Ｓｃｈｕｌｚｅ—Ｋｏｏｐｓ Ｈ．Ｔ ｃｅｌｌｓ—ｄｏ ｔｈｅｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｒｈｅｕｍａｔｉｃ ｉｍ— ｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ？［Ｊ］．Ｚ Ｒｈｅｕｍａｏｌ，２００５，６４（６）：３７７—３８２． ［６］Ｔｏａｂｉ Ｅ，Ｋｅｓｓｅｌ Ａ，Ｍａｈｍｕｄｏｖ ｚ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｏｐｎｔａｎｅｏｕｓ ａｐｏｐ— ｔｏｓｉｓ ｏｆ ＣＤ４ ＣＤ２５ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｈｔ ａｃｔｉｖｅ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉ・ ｔｉｓ ｉｓ ｒｅｄｕｃｅｄ ｂｙ ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｎ ＹＡｃａｄ Ｓｃｉ，２００５，１０５１：５０６ —５ｌ４． ［７］Ｈｕｓｓｅｙ ＲＥ，Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ ＮＥ，ＫｏｗＭｓｋｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ａ ｓｏｌｕｂｌｅ ＣＤ４ ｐｒｏ－ ｔｅｉｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＨＩＶ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎｃｙｔｉｕｍ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］． Ｎａｔｕｒｅ，１９８８，３３ｌ（６１５１）：７８—８１． ［８］Ｍｏｌｄｏｖａｎ ＭＣ，Ｙａｃｈｏｕ Ａ，Ｌｅｖｅｓｑｕｅ Ｋ，ｅｔ ａ１．ＣＤ４ ｄｉｍｅｍ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ ｌｍｍｕ－ ｎｏｌ，２００２，１６９（１１）：６２６１—６２６８． ［９］郭明阳，周厚永，张明友．类风湿因子阳性意义评价［Ｊ］．西南军 医，２００４，６（４）：４９—５Ｏ． ［１Ｏ］蔡文虹，孙保东，洪小平．ＲＦ、ＣＣＰ和ＡＫＡ联合检测在类风湿 关节炎诊断中的评价［Ｊ］．１临床和实验医学杂志，２００６，５（６）： ６７ｌ一６７３． ［１１］Ｇｏｌｕｂ ＴＲ，Ｓｏｎｉｍ ＤＫ，Ｔａｍａｙｏ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｃｅｒ：ｃｌｓａｓ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｃｌｓａｓ ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ ｂｙ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｍｏｎｉ— ｔｏｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｓｃ／ｅｎｃｅ，１９９９，２８６（５４３９）：５３１—５３７．
