PAKPLUS & PAK12操作说明

注：按照每人份使用1条进行实验，阴性对照为1条，详细步骤请见原始英文使用说明书。

用去离子水稀释10x洗脱液，1倍体积Conc. Wash + 9倍体积去离子水。 每孔加250μl洗脱液工作液，室温5 - 10分钟。甩干，倒扣于吸水纸上。

1.用稀释液SD按照3：1比例稀释阴阳性对照、病人血清。

阳性对照 阴性对照 患者 稀释液SD量 150μl 300μl 300μl 血清量 50μl 100μl 100μl 每孔加稀释好的血清50μl，盖膜，37度水浴30分钟，取出甩干，洗板4次。 2.用稀释液SD1：100稀释抗-IgG。

每次4条 每次12条 稀释液SD量 2000μl 6000μl 抗-IgG量 20μl 60μl 除空白孔，每孔加已稀释的抗-IgG 50μl，盖膜，37度30分钟。 取出甩干，洗板4次。

3.用0.5ml去离子水溶解1瓶PNPP粉末，然后用底物缓冲液1:100稀释。

每次4条 每次12条 SB 4ml 12ml PNPP 40μl 120μl 除空白孔，每孔加已稀释的PNPP 100μl，室温避光30分钟。 4.加终止液。

所有孔加100μl，空白孔加200μl终止液。

5.405-410nm读值，490nm或630nm为参照波长。

结果判断：

（阴性对照孔的均值） X （2）= Cutoff值，OD值大于Cutoff值即被判读为阳性

附录1：

PAKPlus

HPA-1a/1a, 3a/3a, 4a/ HPA-1b/1b, 3b/3b, 4a/ HPA-5b/5b HPA-5a/5a

Ib/IX GPIV HLA

PAK12

HPA-1a/1a, 3a/3a, 4a/ HPA-1b/1b, 3b/3b, 4a/ HPA-1a/1a, 3b/3b, 4a/ HPA-5b/5b HPA-5a/5a

GPIb/IX

HLA

NC P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11 A B C D E F G

H B B PC PC

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 NC P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11 A B C D E F G

H B B PC PC

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 IIb/IIIa Ia/IIa GPIIb/IIIa Ia/IIa 附录2：PAK注意事项：

1．PakPlus和Pak12板除阴性对照血清、阳性对照血清及抗-IgG外，其他试剂可以共用。

2．稀释液SD最好用前分出所需的总量，避免加样器反复取用污染。 3．实验环境温度必须保持在22-25度。

4．稀释抗-IgG不能用玻璃或有机玻璃管，应该用塑料管，即聚乙烯管，如1.5ml离心管。

5．切记底物必须用去离子水溶解，用底物缓冲液稀释，不要混淆。底物溶解后，需避光保存，用前稀释。而且一经溶解，只能使用一次。 6．上酶标仪读数时将板底用纸巾擦干净。 7．阳性对照、阴性对照的OD平均值质控标准

OD值 阴性对照（IIb/IIa孔） ≤0.175 阳性对照 ≥1.000 8．实验完毕，需立即将试剂盒放入4度冰箱，避免酶活性降低。

注：如有疑问，请咨询公司技术支持。