薄层色谱法

薄层色谱法 1 原理

样品酸化后,用乙醚提取山梨酸、苯甲酸。将样品提取液浓缩,点于聚酰胺薄层板上,

展开。显色后,根据薄层板上山梨酸、苯甲酸的比移值,与标准比较定性,并可进行概略 定量。 2 试剂 2.1 异丙醇。 2.2 正丁醇。

2.3 石油醚：沸程：30～60℃。 2.4 乙醚: 不含过氧化物。 2.5 氨水。

2.6 6N盐酸: 取100mL盐酸,加水稀释至200mL。 2.7 无水乙醇。 2.8 聚酰胺粉：200目。

2.9 山梨酸标准溶液：精密称取0.2000g山梨酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中

并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg山梨酸。

2.10 苯甲酸标准溶液:精密称取0.2000g苯甲酸,用少量乙醇溶解后移入100ml容量瓶中,

并稀释至刻度,此溶液每毫升相当于2mg苯甲酸。

2.11 展开剂 2.11.1 正丁醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。 2.11.2 异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)。

2.12 显色剂：0.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液,用0.1N氢氧化钠溶液调至pH=8。

2.13 4％氯化钠酸性溶液：于4％氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。 3 仪器 3.1 吹风机。 3.2 层析缸。

3.3 玻璃板：10×18cm。 3.4 微量注射器：10μL,100μL。 3.5 喷雾器。 4 操作方法 4.1 样品提取:

称取2.5g事先混合均匀的样品,置于25ml带塞量筒中,加0.5ml 6N盐酸酸化,用15、

10ml乙醚提取两次,每次振摇1min,将上层醚提取液吸入另一个25ml带塞量筒中,合并乙

醚提取液。用3ml4％氯化钠酸性溶液洗涤两次,静止15min,用滴管将乙醚层通过无水硫

酸钠滤入25ml容量瓶中。加乙醚至刻度,混匀。吸取10.0ml乙醚提取液分两次置于10ml带

塞离心管中,在约40℃的水浴上挥干, 加入0.10ml乙醇溶解残渣,备用。 4.2 测定

4.2.1 聚酰胺粉板的制备：称取1.6g聚酰胺粉,加0.4g可溶性淀粉,加约15ml水,研磨

3～5min,立即倒入涂布器内制成10×18cm、厚度0.3mm的薄层板两块,于室温干燥后,于

80℃干燥1h,取出,置于干燥器中保存。

4.2.2 点样：在薄层板下端2cm的基线上,用微量注射器点1μL、2μl样品液,同时各点

1μl、2μl山梨酸、苯甲酸标准溶液。

4.2.3 展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂(2.11.1或2.11.2)的展开槽

内,展开槽周围贴有滤纸,待溶剂前沿上展至10cm,取出挥干,喷显色剂,斑点成黄色,

背景为蓝色。样品中所含山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比 移值依次为0.82,0.73)。 4.2.4 计算： A1 × 1000

X1 = ─────────────..........(1) m1 × 10/25 ×V2/V1×1000

式中：X1—─样品中山梨酸(苯甲酸)的含量,g/kg; A1—─测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量,mg; m1——样品质量,g; V1——加入乙醇的体积,mL; V2──测定时点样的体积,mL;

10——测定时吸取乙醚提取液的体积,mL; 25——样品乙醚提取液总体积,mL。

注：本方法还可以同时测定果酱、果汁中的糖精。