液相色谱法测定混合物中三元组分

液相色谱法测定混合物中萘、联苯、菲

实验目的

1. 巩固色谱分析的原理

2. 掌握液相色谱的分析原理及过程

3. 了解LC 5500高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 4. 掌握LC 5500高效液相色谱仪的基本操作步骤 5. 掌握HPLC定性、定量（外标）分析的方法

实验原理

根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇为流动相，检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为2nm。

仪器与试剂

仪器：

LC5500液相色谱仪 AP-01P真空泵 过滤装置 容量瓶 药品：

微量注射器

1台

1台

KQ-50B超声波清洗器

1台

1支

1套 50μL

7只

50mL

甲醇（G.R.）、萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、苯（G.R.）、丙酮（G.R.）

实验步骤

一、 流动相的准备

1. 流动相的选择

根据待分离组分性质，选择适当的流动相。本次实验采用无水甲醇作流动相。 2. 流动相的配制

本次实验采用无水甲醇为流动相，故流动相无需配制。 3. 流动相的过滤

选用0.45μm的有机相过滤膜，安装抽滤装置，过滤试剂甲醇。 4. 流动相的脱气

将盛有过滤好甲醇的试剂瓶放于超声波清洗器中，进行脱气处理。视试液总量，脱气时间控制在15~30min。

二、 仪器的准备

1. 更换流动相 2. 排除气泡

3. 开启主机、高压泵电源 4. 进行“梯度淋洗”

调整高压泵显示窗口为仪器工作状态显示窗口，在“方法”菜单中选择“梯度淋洗”命令，设定“时间——流量”关系表，执行“梯度淋洗”命令，以使色谱柱适应流量的变化。 三、 分析步骤

1. “梯度淋洗”结束后，分别设定“分析参数”、“仪器条件”和“样品信息” 2. 设置高压泵流量F1＝1.00mL/min

3. 待仪器各参数稳定后，完成标样与试样的分析

1) 定性分析：分别吸取各个单组份试液完成分析，获取各组分的保留时间 2) 定量分析：

A. 按要求吸取适量标样进行分析

B. 根据定性结果，对各组分检测信号进行判定

C. 依据标样的检测信号，建立组分表，确定“检测信号”与“浓度”的关系

4. 吸取试样，完成分析过程 四、 数据处理

选择适当格式的报告格式，打印报告。 五、 仪器的清理（结束工作）

1. 更换流动相

将流动相重新更换为处理过的甲醇，以利于色谱柱的保护。 2. 清洗“进样阀”

用适量的甲醇清洗进样器、进样阀，以避免样品组分的残留。

液相色谱法的条件试验

实验目的

1. 掌握色谱分析的原理

2. 掌握高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 3. 掌握SY-8100高效液相色谱仪的基本操作步骤 4. 掌握HPLC条件试验的方法以及分离条件的确定

实验原理

本次实验采用ODS-C18色谱柱，以甲醇+水混合液为流动相，根据混合物中萘、联苯和菲在固定相与流动相间分配性质的不同，进行分离。不同比例的甲醇+水混合液为流动相，流动相的极性发生改变，因此混合液的分离条件也发生了改变，选择能将混合液中各组分能充分分离并且相对分析时间短的条件，综合确定HPLC法分析萘、联苯、菲的分析条件，完成对混合液的分析。

检测器采用紫外分光（UV）检测器，检测波长为2nm。

仪器与试剂

仪器：

SY-8100高效液相色谱仪 KQ-50B超声波清洗器 AP-01P真空泵 过滤装置 容量瓶 药品：

微量注射器

1台

1支

1套 50μL

7只

1台 1台

50mL

萘（G.R.）、联苯（G.R.）、菲（G.R.）、甲醇（G.R.）、二次蒸馏水

实验步骤

一、 流动相的准备 1. 流动相的过滤

安装抽滤装置，选用有机相过滤膜，过滤试剂甲醇；选用无机相过滤膜，过滤二次蒸馏水。

2. 流动相的脱气

将盛有过滤好甲醇、二次蒸馏水的试剂瓶分别放于超声波清洗器中，进行脱气处理。 二、 仪器的准备 1. 更换流动相

将A泵的输液管放入处理好的甲醇试剂瓶中；B泵的输液管放入处理好的二次蒸馏水试剂瓶中。

2. 分别排除A、B两个泵输液管中的气泡

3. 开启高压泵A、高压泵B、UV检测器、混合器的电源，打开工作站 三、 分析步骤

1. 分别设置两个高压泵的流量，使总流量为F＝1.00mL/min，分别启动两泵 2. 待基线稳定后，完成标样的分析，记录分析所获得的各组分的保留时间、理论塔板数、分离度。数据填表

3. 选择最佳流动相配比，调整A、B两泵的流量。待基线稳定后吸取标样，完成分析后建立组分表，再完成试样的分析，测得试样中萘、联苯和菲的含量，完成实验 A泵流量 mL/min 1.0 B泵流量 mL/min 0.0 总流量 mL/min 1.0 组分名称 萘 联苯 菲 萘 0.98 0.02 1.0 联苯 菲 萘 0.96 0.04 1.0 联苯 菲 萘 0.94 0.06 1.0 联苯 菲 萘 0.92 0.08 1.0 联苯 菲 萘 0.90 0.10 1.0 联苯 菲 四、 仪器的清理（结束工作） 1. 更换流动相

将流动相重新更换为处理过的甲醇，以利于色谱柱的保护。 2. 清洗“进样阀”

保留时间 min 4.39 4.61 5.20 4.62 4.94 5. 4.92 5.35 6.19 5.18 5.75 6.74 5.62 6.39 7.62 6.11 7.13 9. 分离度 0.00 0.95 2.29 0.00 1.40 2.81 0.00 1.74 3.07 0.00 2.15 3.40 0.00 2.60 3.70 0.00 3.14 4.07

用适量的甲醇清洗进样器、进样阀，以避免样品组分的残留。