湖北中医杂志２０１５年１０月第３７卷第１Ｏ期 Ｈｕｂｅｉ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＴＣＭ０Ｃ ２０１５．Ｖｏ１．３７．Ｎｏ．１０ 一７３一 冷水七皂苷提取工艺研究 徐天玲。，张建超 ，袁林 ，昊峰政 （１．湖北中医药大学，湖北武汉４３００６５；２．风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室，湖北恩施４４５０００；３．武汉理 工大学，湖北武汉４３００７０） 关键词：冷水七；三萜皂苷；提取工艺 中图分类号：Ｒ２８３ 文献标识码：Ａ ．文章编号１０００—０７０４（２０１５）１０—００７３一ｏ２ 土家族药冷水七（Ｉｍｐａｔ￣ｎｓ ｐｒｉｔｚｅＥｉｉ Ｈｏｏｋ． 口＾ｈｕｐｅｈｅｎｓ￣ ２。ｔ供试品溶液的制备及测定 Ｈｏｏｋ．￡）为凤仙花科风仙花属植物，是鄂西土家族常用民族药， 取５ｇ冷水七粉末（４０目），精密称定，置２０ＯｒａＬ的烧瓶中， 药用部位为冷水七根茎，其性味辛、甘、凉，毒性小，具有祛风除 加５０％乙醇溶液５０ｍＬ加热回流提取３次，每次１ｈ，滤过，滤液 湿，散瘀消肿、镇痛止血，清热解毒之功效。用于风湿疼痛、四肢 回收乙醇至粘稠状，加入２０ｍＬ水混溶，用２０ｍＬ的正丁醇提取３ 麻木、关节肿大、急性脘腹疼痛、食积腹胀泄泻、月经不调、经来 次，分取正丁醇层 蒸干，残渣加醋酸乙酯使溶解，定量转移至 腹痛、肠炎痢疾等症ｎ 】。由于其对多种疾病都表现出良好的 ５ｍＬ量瓶中，并用醋酸乙酯稀释到刻度，摇匀，即得样品溶液。 治疗效果，因此，有关土家族药冷水七的研究已经受到科研工作 精密吸取样品溶液５ Ｌ，与对照品溶液５ 点于同一硅胶Ｇ薄 者的关注并做了大量的工作，并通过化学成分研究确定该活性 层板上，以醋酸乙酯一甲酸一水（７：２：２）为展开剂，展开，晾干， 部位主要含有三萜皂苷类化合物 ］。因此冷水七三萜皂苷类 喷以ｌ０％硫酸乙醇溶液，在１０５￣２加热至斑点清晰。显色后立 成分的提取工艺研究十分必要。本文考察不同浓度的乙醇，不 即用相同大小玻璃板覆盖并封边，扫描，在色谱条件下测定。 同的提取时间，不同的提取温度，提取得到冷水七皂苷的量。以 ２．２标准曲线的绘制 此确定最佳提取条件。为冷水七的开发利用提供依据。 精密称取地榆皂苷Ｉ对照品５．１２ｍｇ，加醋酸乙酯制成每 １仪器与试药 １ ｍＬ含０．５１ｍｇ对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液２，４，６， ８，ｌ０ 分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，依上述条件展开，显色， １．１仪器 日本岛津ＣＳ一９３０双波长薄层扫描仪、ＤＨＥ一９０７０Ａ型电 依法扫描测定各斑点积分值。以点样量为横坐标。以测得的峰 面积为纵坐标，得地榆皂苷回归方程为Ｙ；６５９７Ｘ＋５７。ｒ＝０． 热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）；Ｒ一１００１Ｎ型旋转 蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；ＳＨＢ—ＩＩＩ型循环水式多用 ９９９５；表明本品在１．ｏ２ 一５．１０ 间线性关系良好。 ２ ３精密度实验 真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；ＺＦ ６型三用紫外线分析 分别对仪器精密度、板内精密度、板问精密度进行了考察。 仪（上海嘉鹏科技有限公司），平头进样针（ｓＣＡＮＮＥＲ３点样用， 结果如下。 宁波市镇海玻璃仪器厂），预制硅胶Ｇ薄层板（青岛海浪硅胶干 ２．３．１仪器精密度：精密吸取对照品溶液５ ，照上述色谱条 燥剂厂），其他试剂为分析纯。 件操作，重复扫描５次，分别记录峰面积积分值，ＲＳＤ为３．５２％。 １．２试药 结果表明仪器精密度良好。 实验用冷水七药材（购于湖北民族学院附属医院，由湖北中 ２．３．２板内精密度：精密吸取对照品溶液５ ，分别在同一薄 医药大学卢金清教授鉴定为凤仙花科植物冷水七Ｉｍｐａｔ￣ｎｓ ｖａｔ・ 层板上平行点５个点，照上述色谱条件测定，分别记录峰面积积 ｚｅＥｉｉ Ｈｏｏｋ． ∞＾ｈｕｐｅｈｅｎ ｓ Ｈｏｏｋ． 的根茎）。地榆皂苷Ｉ（批 分值，ＲＳＤ分别为２ ９７％。结果表明板内精密度良好。 号：１０１２０９，购于成都瑞芬思生物科技有限公司）。 ２．３．３板间精密度：将对照品溶液５ 点于５块不同薄层板 １．３ 色谱条件 上，照上述色谱条件测定，分别记录峰面积积分值，ＲＳＤ分别为 展开剂乙酸乙酯一甲酸一水（７：２：２）；显色剂：１０％硫酸乙 ３．６１％。结果表明板间精密度良好。 醇；测定波长３７０ｎｍ，狭缝０．４ｍｍ Ｘ０．４ｍｍ；灵敏度中等。 ２，４稳定性实验 ２方法与结果 以同一薄层板的同一斑点，依法每隔３０ｍｉｎ测定１次。结 ．—－——７４．－－—— 湖北中医杂志２０１５年ｌ０月第３７卷第ｌＯ期 回流提取１ｈ，依２．１供试品制备方法处理，扫描测定，５０％的乙 醇提取得到的三萜皂苷含量最高。 ３．２提取时间的选择 果表明，样品的５个斑点在２．５ｈ内稳定，ＲＳＤ均小于５％。结果 表明该操作在２．５ｈ内完成，稳定性较好。 ２．５重复性实验 取同批样品５份，按含量测定项下方法操作，样品的５个斑 点的含量ＲＳＤ均小于５％。 ２．６回收率实验 分别精密称取５．０ｇ冷水七粉末（４Ｏ目）４份置２００ｍＬ烧瓶 中，加入５０％的乙醇５０ｍＬ，分别提取０．５ｈ、１ｈ、１．５ｈ、２ｈ。实验结 果表明，提取１ｈ三萜皂苷可以提取完全。 ３．３提取温度的选择 取５ｇ冷水七粉末（４０目），精密称定，置２００ｍＬ的烧瓶中， 分别精密加入一定量对照品，混匀，照“供试品溶液”项下制备， 精密吸取对照品溶液５ 与供试品溶液５ 点于同一薄层板 上，照上述色谱条件测定，结果见表１。 表１回收率实验结果 分别精密称取５．０ｇ冷水七粉末（４０目）３份置２００ｍＬ烧瓶 中，加入５０％的乙醇５０ｍＬ，在６０℃，８０￣Ｃ，沸水浴中分别提取 １ｈ。实验结果表明，８０￣Ｃ提取三萜皂苷含量最高。 ４讨论 （１）曾采用高效液相色谱法。检测波长为２０５ｎｍ，甲醇和乙 腈作流动相梯度洗脱，但末端吸收干扰较多。故采用薄层色谱 法分离后显色再进行定量分析，以确定最佳工艺提取条件。 （２）薄层层析条件的选择：曾用氯仿一甲醇一正丁醇一醋酸 乙酯（３：４：２：８），乙酸乙酯一甲酸一水＝（７：３：３）为展开剂，但 斑点不能完全分开，且斑点拖尾严重，展开结果不是很理想，后 改用醋酸乙酯一甲酸一水＝（７：２：２）为展开剂，斑点清晰，分离 效果好。 在铺硅胶Ｇ板时，应使用浓度为０．２％ＣＭＣ—Ｎａ为粘合剂， ２．７样品测定 、 加热至显色的时间也要严格控制，ＣＭＣ—Ｎａ浓度过高或加热显 色时间过长，薄层板易碳化，产生背景污染。 （３）薄层扫描条件的选择：通过对斑点的光谱扫描（２００— ７００ｎｍ），最大吸收为３７０ｎｍ，因此确定薄层扫描波长为３７０ ｎｍ。 取３批药材（批号：１３１２０１，１４０１０６，１４０２０１），按供试品制备 方法项下，制备３份样品，精密吸取供试品溶液５１ｚＬ，对照品溶 液５ 分别点于同一薄层板上，依法展开，显色，扫描测定，结果 见表２。 表２样品测定结果 （４）冷水七中三萜皂苷的最佳提取条件为：５０％浓度的乙醇 在８０￣Ｃ水浴中提取３次，每次１ｈ，冷水七中三萜皂苷类成分提取 率高。 参考文献： ０．４６２ ０．５７４ ０．７６４ ０．９Ｏ２ ０．４９０ Ｏ．４７２ ０．４８２ ０．６Ｄ７ ０．７９２ ［１］ 阳辉，刘万红．冷水七总皂苷对小鼠疼痛的影响［Ｊ］．湖北民族学院 学报（医学版），２００９，２６（４）：２３—２４． ０．５３９ ０．７２１ ［２］ 文德鉴，艾明仙，李德清．土家族药冷水七抗炎作用有效部位的筛 选研究［Ｊ］．湖北民族学院学报（医学版），２００７，２４（２）：１３—１４． ０．８８２ ０．４６８ ０．９３５ ０．５２３ ［３］ 周雪峰，唐斓，张鹏．冷水七单体皂苷抗炎镇痛和免疫活性研究 ［Ｊ］．中药药理与临床，２００８；２４（１）：２７—２８． ３提取工艺过程分析 ３．１乙醇浓度的选择 ［４］赵晓亚，孙汉董，吴继洲．冷水七根茎的化学成分研究［Ｊ］．中国中 药杂志，２００５，３０（８）：５８４—５８５． ［５］中国药典一部［Ｓ］．２０１０． （收稿日期：２０１５—０５—２８编辑：任婕） 分别精密称取５．０ｇ冷水七粉末（４０目）４份置２００ｍＬ烧瓶 中，分别加３０％、５０％、６ｏ％、９５％的乙醇溶液５０ｍＬ，８Ｏ℃水浴中
