齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血液生化指标与组织病理学研究

2017, 47 (4) ： 44 -50

Freshwater Fisheries2017年7月 Jul. 2017

齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后 血液生化指标与组织病理学研究

罗辉

u’3,杨月静2,向梦斌2,叶

华

2,郑曙明2,王晓清1>3

(1.湖南农业大学动物科学技术学院，湖南长沙410128; 2.西南大学鱼类繁育

与健康养殖研究中心，重庆402460; 3.水产高效健康生产湖南省协同创新中心，湖南常德415000)

/tydrop/tiZa)对齐口裂腹鱼（Sc/t—raxpreraanii)血液生理生化指标的影

响，将180尾齐口裂腹鱼平均分成6组(4、24和48 h对照组；4、24和48 h感染组）。对照组腹腔注射0.2 mL0.65%的无菌生理盐水，感染组腹腔注射0.2 mL2.5 xl07CFU/mL的嗜水气单胞菌液。分别测定4、24和48 h

摘要：为了研究嗜水气单胞菌

对照组和感染组齐口裂腹鱼各项血液生理生化指标，并对肾脏、肝脏和肌肉组织进行病理学观察。结果显示： 谷丙转氨酶、白蛋白、总胆固醇、葡萄糖、乳酸脱氢酶、钾、钠、氯、钙和磷含量均有显著变化。谷草转氨酶、 碱性磷酸酶、总蛋白、球蛋白、甘油三酯则没有受到显著影响。由此可见，嗜水气单胞菌感染后对齐口裂腹鱼 血液指标产生了显著的影响。对病鱼的病理学观察发现病鱼体表多处出现充血出血，溃瘍和腹水，尤其是肝脏、 肾脏和肌肉组织均出现不同程度的损伤，变性和局部坏死。

关键词：齐口裂腹鱼（Sc/t—

病理

raxpreraanii);嗜水气单胞菌（/leromo;i(XS%(irop/tiZa);血液生理生化指标；组织

文献标识码：A

文章编号：1000^6907-(2017)04-0044-07

中图分类号：S941.4

Blood biochemical indices and histopathology of the Schizothorax prenanti

during early stage of infection by Aeromonas hydrophila

LUO Hui1，2,3，YANG Yue-jing2，XIANG Meng-bin2，YE Hua2，ZHENG Shu-ming2，WANG Xiao-qing1，3

(1. College of Animal Science & Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128 ； Hunan, China ；2. Fisheries Breeding and Healthy Cultivation Research Centre, Southwest University, Chongqing 402460, China ；

3. Collaborative Innovation Center for Efficient and Health Production of Fisheries in Hunan Province, Changde, 415000, Hunan，China)

Abstract ： Schizothorax prenanti (S. prenanti) is an indigenous fish species and distributed in the upstream regions of the

Yangtze River and its tributaries in China. 5. prenanti has important commercial value in the southwest of China because of its fleshness and good flavor as food fish. Concurrently, the wild resources and populations of 5.prenanti have rapidly de­clined because of water pollution and the construction of hydropower stations. In recent years, it has become one of the most important cold - water aquaculture species in China. However, overly dense stocking levels and rapid expansion of aquacul­ture has led to several problems affecting the sustainable development of the industry due to a frequent outbreak of infectious diseases. In order to study the effects of Aeromonas hydrophila (A. hydrophila) on blood biochemical indices, one hundred and eighty juveniles S. with an initial weight of ( 105 ± 36) g were used and randomly divided into 6 groups (4，24，and 48h controlled groups； 4，24，and 48h challenged groups) with three timepoints of 30 fish. Fish used in both the controlled and challenged groups were intraperitoneally injected with equal volumes (0. 2 mL) of sterile physiological saline (0. 65% ) and a bacterial suspension (2. 5 x 107 CFU/mL) , respectively. From fish each group at 4, 24 and 48 h time- points post challenged, blood samples were collected to evaluate haematological biochemical indices and ion concentra-2016 -10 -20;修订日期：2017 -04 -21

资助项目：湖南省教育厅资助科研项目（l5A〇87);国家自然科学基金（314〇23〇2);高校基本业务费专项（XDJK2015C〇34, XD-JK20MC152);西南大学荣昌校区科研启动专项资金（2〇7〇〇2〇8, 2〇7〇0918)

第一作者简介：罗辉（1979 -)，男，博士，讲师，主要从事水产动物遗传育种与生物技术研究。E-mail: luohui2629@126.com通讯作者：郑曙明，E - mail: zhsml99@ 163. com;王晓清，E - mail: wangxiao8258@ 126. com

收稿日期：

第4期罗辉等：齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血液生化指标与组织病理学研究

45

tions. The results showed that the activities of glutamic - pyruvic transaminase ( ALT) , albumin ( ALB) , total cholesterol (CHOL) , blood glucose (GLU) , lactic dehydrogenase (LDH) , the concentration of potassium (K) , sodium ( Na), chlorine ( Cl) , calcium ( Ca) and phosphorus (P) in infected groups was changed significantly. The activities of ALT in­creased significantly on 48 h after challenged, the concentration of ALB decreased significantly on 4 h after challenged, GLU decreased significantly on 48 h after challenged, the concentration of K increased significantly on 24 h after chal­lenged ,Na and Cl increased significantly on 4 h after challenged, Ca decreased significantly on 4 h and 24 h after chal­lenged ,P decreased significantly on 4 h, but increased significantly on 48 h after challenged. There were no significant differences in the level of aspartate aminotransferase (AST) , alkaline phosphatase (ALP) , total protein (TP) , globulin (GLO) , triglyceride (TG). Among the test indices, ALT, K, P was most affected by A. hydrophila, being able to the sensitive index of 5. prenanti after infected. Histopathological examination showed hemorrhage, necrosis, edema and the in­flammatory response in many organs, especially in liver, kidney, and muscle. In conclusion, A. hydrophila could influ­ence the blood biochemical indices of 5. prenanti, and destroy the liver, muscle, and kidney tissue of 5. prenanti.Key words ： Schizothorax prenanti； Aeromonas hydrophila； blood biochemical indices； histopathology

齐口 裂腹鱼（

(

Tchang ))

染后(0 ~48 )齐口裂腹鱼的外观症状及组织病理 学观察，结合4、24和48 三个时点分别设置感 染组和对照组的齐口裂腹鱼血液生理生化指标的测 定，初步探讨了嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼组织损 伤和血液生理生化指标的影响。本研究可为齐口裂 腹鱼后续疾病防治、免疫机制和种质资源保护等相 关研究提供理论基础和数据积累。

h

是长江上游著名的土著经济鱼类，在分类上属于鲤 形目鲤科裂腹鱼亚科裂腹鱼属。齐口裂腹鱼为底栖 性冷水鱼类，其肉质细嫩，肉味鲜美，极具商业价 值[1]。其人工养殖和繁殖的相关研究在2001年取得 初步成功后[2_4]，逐渐在四川、重庆、云南等地形 成了规模养殖[5]。伴随着养殖规模和密度的迅速扩 大，齐口裂腹鱼的养殖业也饱受细菌和寄生虫病的 困扰，其中尤以嗜水气单胞菌等为代表的细菌性疾 病以其高致病性，高死亡率和难治愈性危害极 大[°]。嗜水气单胞菌曾在四川雅安和攀枝花等地 恶性传染，导致养殖鱼30% ~ 80%的感染，病鱼 体表严重损伤，肌肉溃烂，从而失去商品价值[8]。

嗜水气单胞菌 )是鱼类常

h

1材料与方法

1.1

实验材料

本实验于2014年10—11月在西南大学鱼类繁

(/leromcOTasZiyfiropMa

cm。试验鱼经过2周的暂养，停食1 d后选择体质

饲喂。

1.2实验方法1. 2. 1

细菌培养

育与健康养殖研究中心进行。实验材料为人工养殖 的齐口裂腹鱼，体重（105 ±36) ,体长（19 ±2)

g

见的重要病原菌，可引起组织局部损伤、坏死、水 肿、突眼、腹部膨胀、腹水、贫血以及内脏器官损 伤等多种症状，给水产养殖业带来巨大的经济损 失[1U2]。研究表明嗜水气单胞菌感染会引起水产动 物血液生理生化指标发生变化，尤其对免疫功能和 肝功能相关生化指标产生显著影响[5’13_14]。然而目 前关于嗜水气单胞菌感染后对齐口裂腹鱼血液生化 指标和组织病理损伤影响的研究较少[5’15]。病原菌

侵袭水生动物后，在进人体内的最初〇 ~ 24 通常

健壮，反应灵敏的个体进行攻毒实验，攻毒后停止

本研究所用嗜水气单胞菌为西南大学鱼类繁育 与健康养殖研究中心鉴定保存的菌株，分离自患典 型细菌性败血症的南方鲶内脏。将嗜水气单胞菌菌

株在培养基于28 °条件下培养24 ，然后挑

h

为其粘附宿主组织并缓慢扩增期。在成功定植后，

24 ~48 即可达到指数增长期，48 以后细菌的

hh

h

取单菌落于LB培养基，28 °C，200 r/min培养过 夜，取150斗菌液涂布到无氨苄的LB固体培养 基上，在28 °C下培养6 h,用无菌生理盐水收集菌

液，用麦氏比浊法测定细菌数量，再用无菌生理盐 水稀释至2.5

LBC

增殖就进人平台期[16]。因此，如何在感染早期确诊 就显得尤为重要，其研究成果对鱼类的人工养殖和 疾病防治更具指导意义。但嗜水气单胞菌感染后在

细菌缓慢扩增期（〇 ~24 )和指数增长期（24 ~48

xlO7 CFU/mL，置于4 °C保存备用。

1.2.2攻毒试验

选择180尾健康无伤的暂养齐口裂腹鱼，分成 2组，每组3个重复(3个重复分别对应取样时间4、 24和48 )，每重复30尾鱼。第一组为对照组，

h)

h

对齐口裂腹鱼血液生理生化指标和组织病理学

的影响仍未见报道。本实验通过对嗜水气单胞菌感

h

46

淡水渔业

2017 年

腹腔注射0.2

mL 0.65%的无菌生理盐水；第二组

为攻毒组，分别腹腔注射〇. 2 mL 2. 5 x 107CFU/mL

°C

°C

1.2.3样品的采集与测定

在注射无菌生理盐水或嗜水气单胞菌后4、24

壁变薄，上下颌及颐部严重充血（图1)，鳍条及鳍 条基部充血，肛门红肿外凸。解剖后腹腔内有大量 黄色或带血积水，肝、肾、脾等内脏充血甚至肿 胀，严重者肠出现糜烂（图2)。

的嗜水气单胞菌，每组注射结束后记录时间。保持 水温在20 ±1 ，增氧机持续增氧。

h分别在对应重复组中随机取5尾鱼，用 300 mg/L的MS222麻醉，用2 mL —次性无菌注射

和48

器尾静脉取血，采血后测量体长、体重，随后迅速

解剖鱼体，取肌肉、肝脏和肾脏用于组织病理学观 min察。血液迅速放人离心管内，2 000 r/min

离心10

，用移液将上层澄清血液转人PT离心管中

备用。每尾鱼的血液生化指标及离子成分的测定采

用北京九强生物技术有限公司生产的试剂盒，在自 动生化分析仪（Beckman Coulter, USA)测定（其中

酶pmol活单位的定义为37 °C条件下，每分钟转U化1 /L底物的酶量为1个酶活单位，即为/L)。

分别取对照组和有典型症状的齐口裂腹鱼的肝脏、Bouin

肾脏和肌肉组织，用氏液固定24小时，在 经过脱水和透明处理后用石蜡包埋。通过KD-202

轮转切片机切片后

HE染色，用中性树胶封片，在 正置DPT2型0LMPUS显微镜拍摄系统下观察并进

行显微拍照。1.3数据处理

实验所得数据用平均值±标准差

（Mean ± SD) 表示。对照组数据取注射无菌生理盐水三个时点 (4、24和48 h

)的平均值，注射嗜水气单胞菌的

各时点数值经过标准化处理，公式为F=个体某一

指标测定值

x(对照组对应指标三个时点的平均值

/单一时点某指标平均值）。采用SPSS 20. 0统计软

件Duncan

进行数据统计分析。采用单因素方差分析和

法多重比较各组的差异显著性。

2

结果与分析

2.1

攻毒后外观症状

腹腔注射嗜水气单胞菌后4 h

观察齐口裂腹鱼

与对照组无明显差异，游动正常，外观无明显症

状。24 h

开始出现明显发病症状，主要表现为鱼 体发黑，体表粘液分泌增加，部分鱼游动急促，呼

吸加快，继而呆滞不动，体表和鳍条基部可见充血 发红，并出现1尾死鱼。48 h

死鱼数量增至15尾，

鱼体表出现溃疡，充血更加明显，病鱼出现运动失 调，无法保持平衡。临检病鱼可发现体表多处充 血，体表粘液增多，眼球微微外凸，腹部膨大，腹

图1

发病鱼体表充血、溃疡

（^)

Fig. 1 Hyperemia and ulceration on the body

surface of the diseased fish ( ^—)

图2发病鱼内脏充血、肿胀（i)

Fig. 2 The diseased fish showed enlarged

and reddened viscera ( ^—)

2.2嗜水气单胞菌感染对齐口裂腹鱼血液生化指

标的影响

嗜水气单胞菌感染后齐口裂腹鱼血液生化指标 的测定结果见表1。感染组48 h

齐口裂腹鱼血液中

谷丙转氨酶浓度显著高于对照组，同时也显著高于 4 h和24 h

组。血液中谷丙转氨酶浓度随着时间的

延长而升高，尽管24 h与4 h

组之间差异不显著， 但升高的趋势明显。攻毒后4 h

，齐口裂腹鱼血清

h中白蛋白含量显著低于对照组，也低于24 h

和48

组，但白蛋白随着攻毒后时间的延长逐渐升高至

与对照组差异不显著的水平。攻毒的三个时间点血 清中总胆固醇含量与对照组相比，差异均不显著，h 但4 与48 h两组间贝(J

差异显著，从其变化规律可

以看出，随着攻毒后时间的延长，血清中胆固醇含

量逐渐回升，并在48 h

时显著高于4 组，其余各

组间则差异不显著。攻毒后48 h

h

血糖含量显著低

第4期罗辉等：齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血液生化指标与组织病理学研究

47

于对照组，其余两组与对照组差异不显著，且攻毒 后血糖含量随着时间的延长，逐渐降低，但相互之 间没有显著差异。攻毒后各组乳酸脱氢酶含量与对 照组差异均不显著，但48 组显著高于24 组。

著性，且攻毒组各时点之间差异也不显著。但从各 指标的数据可以看出，碱性磷酸酶、总蛋白和球蛋 白在攻毒后存在一定的规律性变化，即在4 时血

hh

h

清中含量最低，并随着时间的延长，有逐渐升高的 趋势。而甘油三脂的变化则是随着时间的延长有逐 渐降低的趋势。

攻毒后血清中谷草转氨酶、碱性磷酸酶、总蛋 白、球蛋白和甘油三酯的含量与对照组均无差异显

表

1嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼血液生化指标的影响

Tab.lEffect of A. hydrophilaon blood biochemical indices of S. prenanti

攻毒组

项目

谷丙转氨酶谷草转氨酶

对照组

4 h24 h40. 31 ±10. 81a236. 68 ±71.7515. 09 ±2.31347. 63 ±149. 37a39.28 ±5.7113.97 ±1.41a25. 31 ±4. 394. 99±1.62ab13.03 ±2. 16ab3.44 ±0.92

48 h66. 19 ±36. 40b167.79 ±55.6817. 12 ±3.84620. 29 ±255. 33b42.69 ±2.9715. 53 ±0. 84a27. 17 ±2. 134. 53 ±0. 93a13.65 ±1.69b3. 05 ±1.25

/(U/L)

/(U/L)

碱性磷酸酶/(U/L)乳酸脱氢酶/(U/L)总蛋白/(g/L)/(g/L)球蛋白/(g/L)葡萄糖/(mmol/L)总胆固醇/( mmol/L)甘油三醋/( nimol/L)

白蛋白

41.71 ±8. 06a2. 00 ± 82. 16. 60 ±5. 18460.08 ±149. 95at) 41.41 ±4. 1814.41 ±1.a27. 01 ±2.767.08 ±1.86b12.91 ±1.59ab3. 96 ±0.88

28.28 ±3. 83a151. 70 ±49. 0014. 35 ±2. 026.98 ±238.50ab38. 32 ±6.9411.96 ±0.91b26. 38 ±6.426.77 ±2. 20ab11.08 ±1.53a3.24 ±0.60

同。

注：同一行数据不同上标字母表示差异显著

（P <〇.〇5)。表2

2.3嗜水气单胞菌感染对齐口裂腹鱼血液离子 水平的影响

嗜水气单胞菌感染后齐口裂腹鱼血液离子水平

的测定结果见表2。攻毒后血液中的离子含量均发 生了显著变化。其中钾、钠和氯离子有相似的变化 规律，攻毒后24 钾离子浓度显著高于对照组，

也在攻毒后4 显著高于对照组，但随着时间的延 长其含量又逐渐降低至对照组相近水平，最终在

24 和48 时与对照组差异不显著。血清中钙离

h

hh

子和磷离子的变化趋势类似，即在攻毒后4 血清 中含量显著低于对照组，但随着时间的延长又逐渐 升高。其中钙离子水平除在4时显著低于对照组 外，24 和48 含量升高，与对照组差异不显著。 磷离子水平则是4 时显著低于对照组，随着时间 的延长逐渐升高，并在48 时显著高于对照组。

h

h

其余各组与对照组差异不显著。而钠离子则是在攻

毒后4 显著升高，24 和48 血中钠离子水平有

hhh

hh

h

h

所回落，与对照组差异不显著。血清中氯离子浓度

表

h

2嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼血液离子水平的影响

Tab. 2Effect of A. hydrophilaon concentration of ionin blood of S. prenanti

攻毒组

项目钟 K/( mmol/L)納 Na/( mmol/L)氣 Cl/( mmol/L)•丐 Ga/( mmol/L)碟 P/( mmol/L)

对照组

0. 30+0. 15 a

139. 19 +4.03 a102.50 +3.58 a2. 36 +0. 15 c1.97 +0.27 b

4 h0. 60 +0. 29 a146. 91 + 12. 97 b107. 50 +1. b2.08 +0. 12 a1.42 +0. 38 a24 h1.99 +0. b138.56 +4.05 a101.21 +2. 39 a2. 18 +0. 15 ab1.84 +0.25 b48 h0. 30 +0. 20 a133.94 +5. 15 a104. 63 +3. 37 ab2. 28 +0. 10 bc2.71 +0. 33 c

48

淡水渔业

2017 年

2. 4组织病理变化

齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌的病理学变化主

要表现为机体多组织器官充血出血，肿胀，细胞坏 死、变性，并伴有炎症。对照组肌肉组织中肌细胞 排列紧密，条纹清晰，细胞核位于细胞边缘。病鱼 肌细胞着色不均，部分区域肌浆溶解，肌原纤维断 裂、弯曲不齐，肌纤维间隙增大（图3)。对照组肾 脏肾小管结构清晰，肾间质毛细血管内充满红细 胞，各细胞结构正常。病鱼肾脏的肾小管上皮细胞 图5 病鱼肝细胞空泡变性，局部区域出现坏死（f

)

排列松散，管腔结构不清晰，肾间质出血，伴有嗜 中性白细胞浸润（图4)。对照组肝脏肝细胞界限清 晰，细胞核圆形深染，位于细胞一侧，胞浆不着色 空泡化。病鱼肝细胞严重空泡变性，细胞核崩解， 细胞融合、界限消失，少数肝细胞出现坏死（图5

_6)〇

图3

病鱼肌细胞着色不均，

部分区域肌浆溶解，肌原纤维断裂（^

)

Fig. 3 The myocytes of disease fish showed uneven coloring,

the sarcoplasm dissolved, the myofibril ruptured

图4病鱼肾小管上皮细胞

排列松散(

―），管腔结构不清，肾间质出血

Fig. 4 The tubular epithelial cells arranged in loose, the lumen structure is unclear, the renal interstitium suffer a hemorrhage

Fig. 5 Liver cells of diseased fish were vacuolar

degeneration and necrosis in local area(卜）

图6

病鱼肝细跑严重空泡变性，细跑核 崩解，细胞融合、界限消失

Fig. 6 Liver cells of diseased fish showed serious vacuolar changes, the nucleus disintegration, cell fusion and

loss boundaries between the cells —)

3讨论

3.1嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼的致病性

过去通常认为致病性嗜水气单胞菌是条件性致

病菌，但近年来的研究表明其更可能是原发性致病 菌[7’17]，( 并已发展成为水产养殖的一大杀手，给我

Cyprinus carpio) ^ fBP ( Carassius auratus) ^ 黄

鑛（

Monopterus albus)、香鱼（Plecoglossus altivelis)、)(

Oncorhynchus mykiss ) ^ { Micropterus salmo-、優触（j'oponica)、白斑狗鱼(Esox lu- cius)、( Rarta catesbeiana ) ^ 瞥(Trionyx sinen-)等水产动物的养殖带来了严重的损失[171]。本 实验使用嗜水气单胞菌人工感染齐口裂腹鱼，导致 其在24 h全身充血出血，48 h

明显出现眼球突出、

溃疡等症状，甚至死亡，与文献报道的齐口裂腹鱼 自然感染症状相似[7’8]，同时与其他淡水鱼类爆发 嗜水气单胞菌病的症状也有诸多相似之处[I7’22-23] &

第4期罗辉等：齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血液生化指标与组织病理学研究

49

3.2嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼血液生化指标和 组织器官的影响

血液中的谷丙转氨酶和谷草转氨酶在正常情况 下酶活低且相对恒定，但当肝脏等组织受到损伤或 受到环境胁迫时，血液中这两种酶活将升高，二者 在评估肝脏和其他器官的状态方面起着重要的作 用[24]。本研究发现齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌 48 时血清中谷丙转氨酶显著高于对照组，同时

crocea)感染哈维氏弧菌（grio

（

)时，观

察到病鱼血液中血糖含量显著下降。余毅等[29]在 患疯狂病的白链 )血液

motorix

指标的研究中也发现病鱼血糖含量显著降低，与本 研究的结果类似。

血清蛋白在维持血浆正常胶体渗透压，对物质 的运输和体内酸碱平衡方面都起到十分重要的作 用。因此血清总蛋白、白蛋白和球蛋白含量也可以 作为衡量鱼类响应外界应激的重要参考指标[2°]。本 h

发现血清中谷丙转氨酶随着感染时间的延长而升

高，在48 h时谷丙转氨酶浓度比4 h

时升高

141%。从肝脏、肾脏和肌肉的病理切片可以看出 病鱼肝脏受损，肝细胞严重空泡变性，细胞核崩 解，细胞融合、界限消失，少数肝细胞出现坏死。 肾脏和肌肉组织也受到破坏，肾间质出血，伴有嗜 中性白细胞浸润，病鱼肌肉组织中肌浆溶解，肌原 纤维断裂、弯曲不齐，肌纤维间隙增大，提示血液 中谷丙转氨酶的升高可能是肝脏等器官受损导致其 分泌到血液中所致。这与大黄鱼ceaharveyi（Larimichthys cro

- )感染哈维氏弧菌（Vibrio )和欧洲鳗鲡患

“狂游病”的研究结果类似[25,26]。

研究表明乳酸脱氢酶的含量与鱼体肌肉组织的 健康状况有关[25,27]。徐晓津等[26]研究发现大黄鱼 感染哈维氏弧菌后病鱼乳酸脱氢酶含量显著升高， 表明大黄鱼肌肉组织受到破坏，这与大黄鱼患病后 产生皮肤溃疡的症状相吻合。本研究发现尽管攻毒 组在4 h和24 h

时乳酸脱氢酶含量与对照组没有显

著差异，但48 攻毒组则显著高于对照组，并显 著高于24 h

h

攻毒组。推测攻毒后鱼体肌肉组织受 损，产生了病变，这与肌肉病理切片发现病鱼肌浆 溶解，肌原纤维断裂、弯曲不齐，肌纤维间隙增大

的病理症状相吻合。有趣的是攻毒后24 组乳酸 脱氢酶含量与对照组和攻毒后4 h

h

尽管没有显著差 异，但却有较明显的下降趋势，其中的原因有待进 一步深人研究。

血中葡萄糖是动物机体生化活动所需能量的来 源之一，在正常生理状态下，其含量相对恒定，但 会随着机体活动和适应环境因子的改变而变化。因 此血糖含量可作为鱼体响应环境应激因子的指示指 标[28]。本研究中，齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后 随着时间的延长，血糖含量显著下降，48 h

组血

糖含量显著低于对照组。这可能是由于机体在病菌 侵人后迅速调动先天性免疫防疫机制以抵抗病原的 粘附和增殖，从而消耗大量能量致使血液中血糖含

量显著下降。徐晓津等[26]在研究大黄鱼

研究中齐口裂腹鱼感染嗜水气单胞菌后血清总蛋 白、球蛋白均没有显著变化，但白蛋白含量在4时显著低于对照组。在24 h和48 h

h

时血清中白蛋 白含量有所回升，并与对照组差异不显著。总蛋白 含量也有攻毒后降低，随后逐渐升高的趋势。分析 原因可能是由于机体在病原侵人机体后迅速动用免 疫防御机制对病原进行清除，白蛋白作为载体在此 过程中被迅速消耗，但随着时间的延长，机体稳态 的调节使白蛋白的数量逐步恢复正常。强俊等[（Sfreptacocczwiraiae

3°] 在研究海豚链球菌 )感染罗非鱼

(Oeoc/iromk spp.)时也观察至IJ血清总蛋白、白蛋 白和球蛋白从〇 ~ 48 h期间经历了先降低后升高的

变化，与本研究观察到的现象类似。

3.3嗜水气单胞菌对齐口裂腹鱼肾脏和血液离子 水平的影响

鱼类的肾脏不仅是重要的免疫器官，同时也是 重要的排泄器官，对调节鱼体渗透压和水盐平衡至 关重要[31]。本研究中发现齐口裂腹鱼肾脏明显受损， 肾小管上皮细胞排列松散，管腔结构不清，肾间质 出血，并伴有嗜中性白细胞浸润。这必然影响鱼体 正常的生理代谢和免疫功能。本研究中发现ClNa+

和

_含量在感染4 h时显著升高，但随后逐渐降低至 与对照组差异不显著。K+含量也在24 h显著升高， 但在48 h也降低到与对照组差异不显著的水平。分

析可能是细菌攻击宿主肾脏等组织，导致细胞骨架 重排，渗透性异常，从而使血中Na+、Cl_、K+

浓

度升高。同时细胞骨架重排等效应是短暂且可逆的， 重排的骨架蛋白在所附着的病菌下部短暂积聚，待 病菌被细胞摄人后，骨架中的某些成分迅速解离， 细胞骨架又恢复到稳定平衡状态[32]，从而使血清中 离子浓度趋于正常。徐晓津等[26K]在大黄鱼感染哈维 氏弧菌的研究中也发现血浆中+和cr

的浓度在

感染后显著升高，与本实验结果一致。

研究表明当肾脏受损时，机体磷代谢就会出现 异常。在人类慢性肾衰竭时，机体磷代谢发生紊

50

淡水渔业

2017 年

单红，张其中，刘强平，等.灭活菌苗免疫的南方鲇外周血

乱，即出现血磷升高[33]。本研究中齐口裂腹鱼感染

后4 血液中磷含量显著低于对照组，而在48 时

[13]

hh

液细胞免疫指标的变化[J].中国水产科学，2005，（3):

显著高于对照组。这可能是病原人侵机体后，磷首

先作为、核酸、磷脂、细胞膜和多种辅酶的重

ATP

要组成成分，参与能量转化等多种生理生化反应而 被消耗，但随着时间的延长，病原对鱼体肾脏的损 害加剧，导致肾脏功能紊乱，磷排泄异常，致使磷 在血液中积聚并迅速升高。肾脏病理切片结果显示 病鱼肾小管上皮细胞排列松散，管腔结构不清晰， 275-280.

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h

开始逐步升高并最终与对照组差异 不显著，但在攻毒后48 h血清钙含量显著高于4

h

的钙含量。这可能是由于病原菌感染后对多种组织 器官产生了破坏作用，机体为了应对病原菌的侵 袭，需要激活多种抗菌相关酶类，从而导致机体动 用更多的Ca

2+参与酶促反应所致。

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(责任编辑:邓薇）