２Ｑ 一年＿４月 冒研究原著Ｉ ＳＴＲ分型法鉴定人ＳＷ一１ ３、２９３Ｔ及ＡＧＳ细胞系种内 及种问污染 刘国娟，蔡伟文，林峻，陈鲤群 （福州大学生物科学与工程学院应用基因组学研究所，福建福州，３５０１０８） 摘要：目的检测研究所使用的人肾上腺皮质癌细胞ＳＷ一１３、人胚肾细胞２９３Ｔ及人胃癌细胞ＡＧＳ ３种细胞系污染情况，并 探索短串联重复序列（ｓｈｏｒｔ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ）分型方法检测人类细胞系污染的可靠性。方法人类基因组上的微卫星位点 携带着大量ＳＴＲ，每个ＳＴＲ核心序列的重复次数随个体不同存在差异，作为一种ＤＮＡ标记使得细胞系在ＤＮＡ水平上具有 个性化。通过荧光聚合酶链式反应体系扩增ＳＴＲ位点，检测的数据与ＤＳＭＺ细胞库进行匹配以对细胞系进行鉴别。结果比 对得出ＳＷ一１３基本匹配，其中２Ｏ个ＳＴＲ基因位点中只有ＴＨ０１位点的两个等位基因重复数为７和８，与ＤＳＭＺ细胞库中此 等位基因重复数７和７有差异，其余均一致在可接受范围内。细胞系２９３Ｔ、ＡＧＳ等位基因的重复数与ＤＳＭＺ细胞库完全 匹配。结论ＳＴＲ分型检测方法被ＡＴＣＣ、ＤｓＭｚ等权威机构推崇，且此研究采用２０位点检测法涵盖ＡＴＣＣ一９位点及中检院一 １６位点检测法，该法权威可靠。本所３种细胞系遗传稳定，均无种内或种间污染。 关键词：ＳＴＲ分型；人ＳＷ一１３、２９３Ｔ及ＡＧＳ；细胞系交叉污染 中图分类号：ＤＦ７９５．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：２０９６—１４１３（２０１７）１０－一０００１—０４ ＳＴＲ ｔｙｐｉｎｇ ｉｎ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｒ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＳＷ－１３， ２９３Ｔ ａｎｄ ＡＧＳ ｃｅｌｌ ｆｉｎｅｓ ＬＩＵ Ｇｕｏ－ｊｕａｎ，ＣＡ１ Ｗｅｉ—ｗｅｎ，ＬＩＮ Ｊｕｎ．，ＣＨＥＮ Ｌｉ—ｑｕｎ （Ｉｎｓｉｔｔｕｔｅ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｇｅｎｏｍｉｅｓ ｏｆ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｎ Ｆｕｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｚｈｏｕ ３５０１０８，Ｃｈｉｎａ）＇ ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ａｄｒｅｎｏｃｏｒｔｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＳＷ—ｌ３ ｃｅｌｌｓ．ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｋｉｄｎｅｙ ２９３Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｈｕｍａｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ＡＧＳ ｃｅｌｌｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｏｕｒ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌｉａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＳＴＲ ｔｙｐｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍ［ｉｃｒｏｓａｔｅｌｌｉｔｅ ｌｏｃｉ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ｃａｒｒｙ ｌａｒｇｅ ａｍｏｕｎｔｓ ｏｆ ＳＴＲ．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｒｅｐｅｔｉｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｒｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｆｏｒ ｅａｃｈ ＳＴＩＲ ｖａｒｉｅｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ ａｓ ａ ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ ｍａｋｅｓ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｐｅｒｓｏｎａｌｉｚｅｄ ａｔ ｔｈｅ ＤＮｒＡ ｌｅｖｅ１．ＳＴ］Ｒ ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ．ａｎｄ ｔｈｅ ｄａｔａ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ＤＳ］ＭＺ ｃｅｌｌｌ ｂａｎｋ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＳＷ一１ ３ ｂａｓｉｅｌｙ ｍａｔｃｈｅｄ．Ａｍｏｎｇ ｉｔｓ ２０ ＳＴＲ】Ｌｏｃｉｓ．ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｏｎｌｙ ｔｗｏ ａｌｌｅｌｅ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｎ ＴＩ｛［０１】ｌＯＣＵＳ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｓｏｍｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｗｉｔｈ ＤＳＭＺ ｃｅ１．１ ｂａｎｋ．ｂｕｔ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ａｃｃｅｐｔａｂｄｅ．Ｔｈｅ ｒｅｐｅａｔ ｎｕｍｂｅｒｓ ｏｆ ２９３Ｔ ａｎｄ ＡＧＳ ａｌｌｅｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｍａｔｃｈｅｄ ｗｉｔｈ ＤＳＭＺ ｃｅｌＩ ｂａｎｋ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉ＇ｉｏｎ ＳＴＲ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｉｓ ｈｉｇｈｌｙ ｒｅｓｐｅｃｔｅｄ ｂｙ ＡＴＣＣ．ＤＳＭＺ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ａｕｔｈｏｒｉｔｉｅｓ．Ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ ａｄｏｐｔｓ ２０ ＳＴＲ ｌｏｃｉｓ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｗｈｉｃｈ ａｕｔｈｏｒｉｔａｔｉｖｅｌｙ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｙ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ９ ＳＴＲ】ｌｏｅｉｓ ｏｆ ＡＴＣＣ ａｎｄ １６ ＳＴＲ ｌｏｃｉｓ ｏｆ ＮＩＦＤＣ．Ｔｈｅ ３ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｒｅ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｈａｓ ｎｏ ｉｎｔｒａｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｒ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ． ＫＥＹＷｏＲＤＳ：ＳＴＲ ｔｙｐｉｎｇ；ｈｕｍａｎ ＳＷ一１３、２９３Ｔ、ＡＩＧＳ ｃｅｌｌ¨ｆｉｎｅｓ；ｃｒｏｓｓ－一ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ 细胞系的误认、交叉污染及诠释不充足严重影响科研 法，兼容了９－ＳＴＲ基因位点和１６一－ＳＴＲ基因位点检测法数据 之外，还增加了４个（Ｄ２Ｓ１３３８、Ｄ６Ｓ１０４３、Ｄ１２Ｓ３９１￣Ｉ］Ｄ１９Ｓ４３３） 基因位点，使其多态性与准确性更高。 １材料与方法 １．１细胞Ｄ ｒＡ的提取 数据的可靠性与重现性，造成时间、精力和科研经费的浪 费…。ＭＡＣＬＥＯＤ等［ｚｌ对人类细胞系原始库交叉污染做的 ２５２个提交到ＤＳＭＺ的人类细胞系调查，有１８％的细胞系与 其他细胞系有交叉污染，仅ＨｅＬａ细胞自身就占据细胞交叉 污染事件的２５％。细胞系污染的问题被称为科研界迫切需 要解决的质量控制问题＿１ 。因此ＮＩ＇Ｈ、美国典型菌种保 藏中心（ＡＴＣＣ）、Ｎａｔｕｒｅ和Ｓｃｉｅｎｃｅ等机构近年来对此多次 发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定＿４＿ １，以确保实验的 准确性。 细胞系ＳＷ一１３、２９３Ｔ、ＡＧＳ来自本研究所。主要试剂： ＤＭＥＭ／Ｈｉｇｈ Ｇｌｕｃｏｓｅ购自ＨｙＣｌｏｎｅ公司；Ｆ－一１２Ｋ Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｍｉｘ－一 ｔｕｒｅ（１×）购白Ｇｉｂｃｏ公司；Ｔｒｉｐｓｉｎ０２５％Ｏｘ）Ｓｏｌｕｔｉｏｎ购自Ｈｙ— Ｃｌｏｎｅ公司；ＰＢＳ缓冲液；血液细胞基因组提取试剂盒购白Ｔｉａｎ— ｇｅｎ公司。所用仪器：ＢｉｏＳａｆｅｒ ９７００ ＰＣＲ扩增仪、离心机等。 １．２ ＳＴＲ分型 人类基因组上ＳＴＲ出现频率很高，且每个ＳＴＲ关键序列 的重复次数都是特异的，因此大多数ＳＴＲｓ基因座具有多态 性圈。本研究中采用目前最全面准确的２０－．－ＳＴＲ基因位点检测 ＤＯＩ：１０．１９３４７／ｊ．ｃｎｋｉ．２０９６—１４１３．２０１７１０００１ 主要试剂：ＰＣＲ荧光标记引物；Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（２＿５ Ｕ／ｉｘＤ， ＤＮＡ模板等。所用仪器：ＢｉｏＳａｆｅｒ ９７００ ＰＣＲ扩增仪；离心机； 作者简介：刘国娟（１９８９一），女，汉族，山东滨州人，硕士。研究方向：遗传学。 通讯作者：陈鲤群，Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｌｉｑｕｎａｉｒ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ． 基金项目：国家自然科学基金（Ｎｏ．３１５００６１６）。 ——１—— ２０１７年４月 ２００￣ＬＰＣＲ反应管等。 ２步骤和方法 ２．１ ＳＴＲ鉴定流程 料、电压不稳等其他因素形成的杂峰。当２个以上基因位点 出现３个或３个以上的峰，则可判定该细胞被污染，混合细 胞的种类越多，ＳＴＲ位点出现的等位基因峰也越多，污染就 越严重。 细胞ＤＮＡ的提取一荧光引物扩增ＳＴＲ位点一３７３０毛细 管电泳一数据分析获得ＳＴＲ基因座信息一数据库比对和结 果分析。 ２．２细胞ＤＮＡ提取 其中分型判断标准为：若ｌ０个位点中出现２个及以上 位点出现三个分型，则表示此细胞株存在交叉污染：若与 标准分型相比，某些位点包含标准分型及另外一种分型，则 判断此株细胞和标准细胞为杂合子和纯合子关系；若出 首先将培养到合适数量的贴壁细胞培养液去除，沿培养 皿壁加入ＰＢＳ缓冲液清洗后吸弃，加入适量ＴＲＩＰＳＩＮ ０．２５％ （１×）Ｓｏｌｕｔｉｏｎ吸打处理为细胞悬液转移至２ ｍＬ离心管中。此 后按照ＴｉａｎＧｅｎ ＴＩＡＮａｍｐ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ Ｋｉｔ操作步骤提取细 胞ＤＮＡ。 ２－３荧光引物扩增ｓＴＲ位点 现５０％或以上分型不符合，则说明此细胞株并非鉴定的 细胞株。 ３结果与分析 ３．１ ＳＴＲ分型方案 用ＴｉａｎＧｅｎ的基因组抽提试剂盒提取ＤＮＡ，采用２０一 ＳＴＲ扩增方案扩增，在ＡＢＩ ３７３０ＸＬ型遗传分析仪上对ＳＴＲ 位点和性别基因Ａｍｅｌｏｇｅｎｉｎ进行分组检测，分组检测方案见 表Ｉ。 表１分组方案 ｌ０ Ｌ扩增体系中含ＩＯ￣ＳＴＲ Ｂｕｆｆｅｒ ｌ ｔｚＬ，ｌ０×引物对混 合物１ ＩＬＬ，Ｔａｑ酶（２．５ Ｕ／ｐ￣Ｌ）０．４ ，ＤＮＡ模版１ Ｌ，双蒸水 ６．６ ｔｘＬ。扩增条件：９５℃变性１１ ｒａｉｎ，９４℃变性３０ Ｓ，６０℃退 火３５ ｓ，７２ ｏＣ延伸５０ Ｓ，共ｌ０个循环；９０℃变性３０ ｓ，６０ ｏＣ退 火３５ Ｓ，７０℃延伸５０ Ｓ，共２０个循环。６０℃延伸３０ ｍｉｎ。４ ｏＣ 保存。 ２．４ ＰＣＲ产物毛细管电泳 将ｌ Ｌ ＰＣＲ扩增产物与８．５ Ｌ去离子甲酰胺和 ０．５ ＩｘＩ 荧光标记的Ｌａｄｄｅｒ内标（ＣＸＲ）混合后，９５℃先变 性３ ｍｉｎ，再在冰上冷却３ ｍｉｎ，进样毛细管电泳基因分析仪 电泳。 ２．５采用Ｇｅｎｅｍａｐ软件对扩增结果进行分析 ３．２ Ｇｅｎｅｍａｐ分析 扩增样品的理想峰高应小于２ ０００ ＲＦＵ。软件根据相对 Ｇｅｎｅｍａｐ分析细胞系ＳＷ一１３、２９３Ｔ、ＡＧＳ ＳＴＲ位点如图 ３、４、５所示。 ３＿３ ＳＴＲ分型结果与分析 分子质量内标得到ＰＣＲ产物片段的精确长度，并计算出每 个等位基因ＳＴＲ重复单位的重复次数。当两个等位基因的 蕈复次数相同时，图谱中只出现】个峰，当两个等位基因的 重复次数不同时，图谱中会出现２个峰。其中也会有由于染 Ａ １ 根据图１、２、３对细胞系ＳＷ一１３、２９３Ｔ、ＡＧＳ检测结果信 息见表２。 Ｂ１ Ｄ１ Ｆ１ 图１ ＳＷ一１３ ＳＴＲ图谱（Ａ１一Ｆ１） 洼：图ＡＩ中ＴＨＯ１位点等位基因重复数为７和８与ＤＳＭＺ数据库数据ＳＷ一１３此等位基因重复数７和７有差异。 ２一 ２０ｌ７年４月 ２８０００ ２４０００ ２２Ｏｏ０ ２ｏｏ００ １８１）００ １６Ｏ０ｏ ｌ４０００ ｌ２００ｏ ｌ００００ ８０００ －－ ｒ 露＿ 。 ６００ｏ ４０００ ２Ｏ００ Ｊ ４ｌ碰・ｌ ８ Ｊ ｝ａ１ ０ Ｉｌ 图２ ２９３Ｔ ＳＴＲ图谱（Ａ２一Ｆ２） Ｃ３ 图３ ＡＧＳ ＳＴＲ图谱（Ａ３一Ｆ３） 由上表可以得出ＳＷ一１３细胞没有发现２个及以上多等 位基因，即不存在交又污染。ＴＨ０１位点ＤＳＭＺ细胞库标准分 型略有不同，匹配率９０％，考虑此株细胞与标准细胞株为杂 合子与纯合子关系，细胞号对应ＪＣＲＢ９０６９，可确认此细胞系 为ＳＷ一１３。２９３Ｔ和ＡＧＳ两株细胞ＤＮＡ分型在细胞系检索中 分别可以找到完全匹配的细胞系，两细胞系均未发现多等位 基因。不存在细胞系污染，ＤＳＭＺ数据库分别显示细胞名为 ２９３Ｔ、２９３Ｔ和ＨＥＫ ２９３Ｔ／１７细胞号分别对应６３５、ＲＣＢ２２０２ —３一 ２０１７年４月 和ＡＣＳ一４５００及显示细胞名ＡＧＳ细胞号对应ＣＲＬ一１７３９。三 种细胞系鉴定结果见表３。 表２三种细胞系的２０一ＳＴＲ位点基因分型结果 来源于其他物种的污染。但目前没有单一方法可提供所有的 信息来鉴定一个人类细胞系，ＳＴＲ分型仍是这一时期的黄金 标准。 本所研究的ＳＷ一１３、２９３Ｔ及ＡＧＳ三株细胞系遗传稳定 均未受到污染，ＳＴＲ基因分型在ＤＳＭＺ细胞库及ＡＴＣＣ细胞 库分别可以找到所对应的细胞系。当两种不同基因的人源细 胞系培养在同一体系中；细胞系的交叉污染可能发生在种 内，也可能发生在种间。细胞系种内及种间交叉污染是一个 普遍存在的问题并且错误鉴定的警报经常被忽视＿１ 。由于实 验设计的复杂性与细胞系使用的增加，在日常细胞培养中无 意混合细胞系的可能性是永远存在的ｆ１ 。为了避免细胞污染 注：ＳＷ一１３细胞株ＤＮＡ分型检测中ＴＨ０１等位基因重复单元数显示７、８ 与ＤＳＭＺ数据库７、７有改变。差异可能由无效等位基因、基因突变、实验技 术水平操作误差以及传代次数差异引起的基因突变造成。 表３细胞系检测结果 检测样品等位基因数ｔ＞３匹配细胞系比对细胞库 匹配 是否污染 ４讨论 用于细胞系交叉污染检测的方法主要有同工酶分析［９１、 染色体核型分析㈣、人类白细胞抗原分型分析（ＨＬＡ）、免疫分 型分析以及ＤＮＡ指纹图谱ｆｌ１ 等。ＡＬＳＴＯＮ等［ １表示这些方法 虽都可以鉴别细胞系但有不同程度的不确定性。传统的同工 酶图谱等分析法仅能鉴别不同种属的细胞系且有不同程度 的歧义和缺陷［１２－１３］。相比之下，ＳＴＲ分型法则可以鉴别不同个 体来源的人源细胞系允许细胞系在ＤＮＡ水平上的个性化 。 ＳＴＲ位点由不同重复次数的ＤＮＡ短片段组成，且能够被聚 合酶链式反应扩增出任意片段且扩增产物能够用不同颜色 的荧光标记使其易于区分＿１５１。ＳＴＲ分析快速、廉价、易于自动 化生成适合于标准参考数据库格式的重复数据而被大多实 验室所采纳，并由ＡＴＣＣ推荐作为鉴定细胞系污染标准ｎ６１。 目前ＳＴＲ分型可以增加数据可信性、节省研究人员大量 时间以及避免研究错误鉴定的细胞的不利影响，对科研产生 重大的影响。然而ＳＴＲ分型法也存在某些局限，如ＳＴＲ分型 法无法知道具体是什么细胞污染物及污染程度，且无法检测 一４ 造成的不必要的影响，医学研究者应对培养的细胞进行ＳＴＲ 鉴定，确保细胞系的纯正，实验操作应严格遵守无菌操作规 范，受到污染的细胞尽可能选择灭活后丢弃。 参考文献： 『１］ＡＬＳＴＯＮ—ＲＯＢＥＲＴＳ－＇ＢＡＲＡＬＬＯＮ Ｒ３３ＡＵＥＲ ＳＲ，ｅｔ ａＬＣｅｌｌ ｌｉｎｅ ｍｉｓｉｄｅｎ－ ｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，１０（６）：４４１－４４８． ［２］ＭＡＣＬＥＯＤ ＲＡ，ＤＩＲＫＳ ＷＧ，ＭＡＴＳＵＯ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｗｉｄｅｓｐｒｅａｄ ｉｎ— ｔｒａｓｐｅｃｉｅｓ ｃｒｏｓｓ—ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｒｉｓｉｎｇ ａｔ ｓｏｕｒｃｅ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，１９９９，８３（４）：５５５－５６３． 【３］ＮＡＲＤＯＮＥ ＲＭ．Ｃｕｒｂｉｎｇ ｒａｍｐａｎｔ ｃｒｏｓｓ—ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｉｓｉｄｅｎ— ｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，２００８，４５（３）：２２１—２２７． ］ＬＯＲＳＣＨ ＪＲ，ＣＯＬＬＩＮＳ ＦＳ，ＬＩＰＰＩＮＣＯＴＴ—ＳＣＨＷＡＲＴＺ Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏ— ｇＹ．Ｆｉｘｉｎｇ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｗｉｔｈ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１４，３４６（６２１６）：１４５２—１４５３． ｆ５１ ＭＣＬＡＲＥＮ ＲＳ，ＲＥＩＤ Ｙ，ＳＴＯＲＴＳ ＤＲ．Ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ： ｔｈｅ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｆｉｒｓｔ ｓｔｅｐ ｉｎ ａｎｙ ｐｒｏｊｅｃｔ ｕｓｉｎｇ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１３，９６３：３４１—３５３． ［６］ＮＥＩＭＡＲＫ Ｊ．Ｌｉｎｅ ｏｆ ａｔｔａｃｋ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１５，３４７（６２２５）：９３８—９４０． 『７］ＭＡＳＴＥＲＳ ＪＲ．Ｃｅｌｌ—ｌｉｎｅ ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ：ｅｎｄ ｔｈｅ ｓｃａｎｄａｌ ｏｆ ｆａｌｓｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０１２，４９２（７４２８）：１８６． ［８］ＯＢＲＩＥＮ ＳＪ．Ｃｅｌｌ ｃｕｈｕｒｅ ｆｏｒｅｎｓｉｃｓ ．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１，９８ （１４）：７６５６—７６５８． ［９］张敏，陈小云，蒋桃珍，等．同工酶分析法鉴定ｓＴ细胞系的研究ｌＪ１． 中国兽药杂志，２０１５，４９（１２）：６—９． ［１０］ＣＩＡＮＦＲＩＧＬＩＡ Ｍ，ＪＯＨＮＳＯＮ ＪＰ，ＮＡＢＨＯＬＺ Ｍ．Ｋａｒｙｏｔｙｐｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｍｕｒｉｎｅ ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ Ｔ—ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔ Ｃｙｔｏｇｅｎｅｔ，１９８４，ｌ１（４）： ３６９－３７９． 【１１］ＣＡＢＲＥＲＡ ＣＭ，ＣＯＢＯ Ｆ，ＮＩＥＴＯ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｔｅｓｔｓ：ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｃｒｏｓｓ－ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００６，５ １（２）：４５—５０． ｆ１２］ＭＡＳＴＥＲＳ ＪＲ，ＴＨＯＭＳＯＮ ＪＡ，ＤＡＬＹ—ＢＵＲＮＳ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｓｈｏａ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００１，９８（１４）：８０１２—８０１７． ［１３］孟淑芳，吴瑜，冯建平，等．ＳＴＲ图谱用于生物制品生产用人源细胞 鉴别的研究［Ｊ］．中华微生物学和免疫学杂志，２００９，２９（７）：６３６—６４１． 【１４］ＤＩＲＫＳ ＷＧ，ＤＲＥＸＬＥＲ ＨＧ．ＳＴＲ ＤＮＡ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ： ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａ—ａｎｄ ｉｎｔｅｒｓｐｅｃｉｅｓ ｃｒｏｓｓ—ｃ０ｎｔａｍｉｎａｔｉ０ｎｌＪ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１３（９４６）：２７—３８． 『１５］ＡＬＳＴＯＮ—ＲＯＢＥＲＴＳ。ＢＡＲＡＬＬＯＮ Ｒ，ＢＡＵＥＲ ＳＲ，ｅｔ ａ１．Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｍｉｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ｔｈｅ ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｅｎｄ［Ｊ］．Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，１０ （６）：４４１—４４８． ［１６］ＣＡＰＥＳ－ＤＡＶＩＳ Ａ，ＲＥＩＤ ＹＡ，ＫＬＩＮＥ ＭＣ，ｅｔ ａ１．Ｍａｔｃｈ ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｉｏｎ：ｗｈｅｒｅ ｄｏ ｗｅ ｄｒａｗ ｔｈｅ ｌｉｎ￣ 【ＪＪ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ， ２０１３，１３２（１ １）：２５１０－２５１９． 『１７］ＢＵＥＨＲＩＮＧ ＧＣ，ＥＢＹ ＥＡ，ＥＢＹ ＭＪ．Ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ ｃｒｏｓｓ—ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ： ｈｏｗ ａｗａｒｅ ａｒｅ Ｍａｍｍａｌｉｎａ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｉｓｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐｒｏｂｌｅｍ ａｎｄ ｈｏｗ ｔｏ ｍｏｎｉｔｏｒ ｉｔ［Ｊ］．Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖ Ｂｉｏｌ Ａｎｉｍ．２００４．４０（７）：２１ １－２１５．
